硫代修饰：
可以增强探针的稳定性，抵抗核酸酶的降解，同时可能改变探针的一些物理化学性质，有助于其在生物体内的应用，如在原位杂交等实验中提高探针的耐受性。

（脱氧次黄嘌呤）dI 修饰：
dI 可与多种碱基配对，能增加探针的碱基配对灵活性和特异性，常用于一些需要特殊碱基配对模式的核酸检测或基因编辑等实验中，可改善探针与靶序列的结合能力。

（脱氧尿嘧啶）dU 修饰：
在某些核酸扩增反应中，如 PCR，dU 修饰的探针可用于区分新合成的 DNA 链和原始模板链，还可用于引入特定的标记或进行后续的酶切等操作。此外，在 RNA 干扰实验中，dU 修饰的寡核苷酸可以作为一种稳定且有效的干扰分子。

5 - Methyl dC 修饰：
这种修饰可以影响 DNA 的甲基化状态，进而影响基因的表达调控。在表观遗传学研究中，5 - Methyl dC 修饰的探针可用于检测特定基因区域的甲基化水平，帮助了解基因表达的调控机制以及与疾病发生发展的关系。

2' - O - Me - C 修饰、2' - O - Me - G 修饰、2' - O - Me - U 修饰、2' - O - Me - A 修饰：
这些 2'-O-Me 修饰可以增强核酸探针的稳定性，提高其对核酸酶的抗性，同时还能改善探针与靶标 RNA 的结合亲和力和特异性。常用于反义核酸技术、RNA 干扰等领域，用于抑制特定基因的表达或研究基因功能。
 
5 - Carboxy - dC 修饰、5 - Hydroxymethyl - dC 修饰、5 - Formyl - dC 修饰：
这些修饰的探针可用于检测 DNA 的氧化损伤或特定的表观遗传标记。例如，5 - Hydroxymethyl - dC 是一种重要的表观遗传修饰，其修饰的探针可用于研究 DNA 羟甲基化在发育、疾病等过程中的作用。此外，这些修饰也可用于标记 DNA，以便进行后续的分离、检测等操作。

N6 - Me - dA 修饰：
主要与 DNA 的甲基化调控有关，可影响基因的表达和染色质的结构。在研究基因表达调控、细胞分化以及疾病发生机制等方面，N6 - Me - dA 修饰的探针可用于检测特定基因区域的这种甲基化修饰，有助于揭示相关的分子机制。

2’-F - 碱基修饰：
2’-F 修饰可以增强核酸的稳定性，提高其对核酸酶的抵抗能力，同时还能改变核酸的构象和热力学性质，使探针与靶标核酸的结合更加稳定和特异。常用于核酸药物研发、基因检测等领域，可提高核酸药物的疗效和基因检测的准确性。
 

磷酸基团，氨基基团和空间子基团修饰的应用场景见下面：
磷酸基团 Phosphorylation/5'-Phosphorylation 和磷酸基团 Phosphorylation/3'-Phosphorylation

• 5'-Phosphorylation：在 DNA 连接反应中，5' 端磷酸基团是连接酶作用的关键位点，可使 DNA 片段之间通过磷酸二酯键相连，常用于基因克隆、DNA 文库构建等。还可用于激酶活性检测实验，通过检测底物 5' 端磷酸化水平来反映激酶的活性。
• 3'-Phosphorylation：可以防止核酸外切酶从 3' 端对核酸进行降解，增加核酸分子的稳定性。在一些 DNA 测序方法中，3' 端磷酸化修饰可用于阻止 DNA 链的延伸，从而实现对特定碱基位点的测序分析。

氨基基团 Amino/5'-Amino、氨基基团 Amino/3'-Amino 和氨基基团 Amino/5'-NH₂ C₁₂

• 5'-Amino 和 3'-Amino：氨基基团可用于连接各种报告基团或功能性分子，如荧光染料、生物素等，从而实现对核酸分子的标记和检测。此外，氨基修饰还可用于与固相载体表面的活性基团发生反应，将核酸固定在载体上，用于核酸杂交芯片、亲和层析等实验。常用5端C6-NH2。
• 5'-NH₂ C₁₂：长链的 C??氨基修饰可以增加核酸分子与其他分子之间的距离，减少空间位阻，使标记或连接的分子能够更自由地发挥作用，常用于需要避免空间干扰的生物检测或分子相互作用研究中。

空间子 Spacers/Spacer C₃、空间子 Spacers/Spacer 9 和空间子 Spacers/Spacer 18

• Spacer C₃、Spacer 9 和 Spacer 18：主要作用是在核酸分子与连接的功能基团之间提供一定的空间间隔，减少空间位阻，使功能基团能够更好地与目标分子相互作用。不同长度的空间子可根据具体实验需求进行选择，例如在荧光定量 PCR 中，合适长度的空间子可以使荧光基团和淬灭基团之间的距离恰到好处，提高检测的灵敏度和准确性。

巯基基团 Thiolation/5'-SH C₆、巯基基团 Thiolation/3'-SH C?（3’-SH C₆）、巯基基团 Thiolation/3'-diThiol和巯基基团 Thiolation/3'-diThiol即 DTPA

• 5'-SH C₆和 3'-SH C₆（3’-SH C₆）：巯基可以与金、银等金属表面发生特异性结合，常用于将核酸固定在金属纳米颗粒或金属电极表面，构建生物传感器用于检测生物分子。此外，巯基之间还可以形成二硫键，用于核酸分子的交联或与其他含巯基的分子进行偶联反应。
• 3'-diThiol和 3'-diThiol即 DTPA：DTPA 是一种多齿配体，具有很强的金属离子螯合能力。3'-diThiol * 修饰的核酸可以通过 DTPA 与放射性金属离子或稀土金属离子等进行螯合，用于放射性标记或荧光标记，在核医学成像、生物分子追踪等领域有重要应用。

生物素 Biotin/5'-Biotin、生物素 Biotin/5'-Biotin TEG、生物素 Biotin/3'-Biotin 和生物素 Biotin/3'-Biotin TEG

• 5'-Biotin 和 3'-Biotin：生物素可以与链霉亲和素或亲和素特异性结合，这种特异性结合具有很高的亲和力和稳定性。因此，生物素修饰的核酸可用于亲和纯化、免疫检测、原位杂交等实验，通过与标记有荧光素、酶等的链霉亲和素或亲和素结合，实现对核酸分子的检测和定位。
• 5'-Biotin TEG 和 3'-Biotin TEG：TEG（四乙二醇）是一种亲水性的间隔臂，可增加生物素与核酸之间的距离，减少空间位阻，提高生物素与链霉亲和素的结合效率，同时增强核酸在水溶液中的溶解性和稳定性，常用于需要高效结合和稳定检测的生物分析实验中。

地高辛 Digoxin/5'-Digoxin 和地高辛 Digoxin/3'-Digoxin

• 5'-Digoxin 和 3'-Digoxin：地高辛是一种半抗原，可被地高辛特异性抗体识别。地高辛修饰的核酸可用于核酸杂交实验、原位杂交等，通过与地高辛抗体结合，再利用标记有荧光素、酶等的二抗进行检测，从而实现对特定核酸序列的定位和定量分析，尤其在病毒检测、基因定位等方面有重要应用。

Inverted dT/3'-Inverted dT

• 3'-Inverted dT：常用于构建 DNA 发夹结构或作为核酸分子的末端保护基团。由于其结构与正常的 DNA 链方向相反，可阻止核酸外切酶对 3' 端的降解，增加核酸分子的稳定性。同时，在一些核酸适配体的设计中，Inverted dT 可以改变核酸的空间构象，影响其与靶分子的结合特异性和亲和力。

ddC/3'-ddC

• 3'-ddC：是一种双脱氧胞苷，在 DNA 测序中，它可以作为链终止剂。由于其 3' 位没有羟基，不能与下一个核苷酸形成磷酸二酯键，从而使 DNA 链的延伸在特定位置终止，通过对不同长度的终止片段进行电泳分离和检测，可确定 DNA 的序列。此外，在一些抗病毒药物的研发中，ddC 类似物可作为核苷酸类似物抑制剂，抑制病毒 DNA 的合成，从而发挥抗病毒作用。

双标记荧光探针的修饰类型：
双标记荧光探针并不一定就是 TaqMan 探针。
1  TaqMan 探针
TaqMan 探针:
TaqMan 探针是一种双标记的水解探针，属于双标记荧光探针的一种类型。它的 5’端携带荧光基团，3’端则携带淬灭基团。在 PCR 反应中，TaqMan 探针与模板特异性结合后，DNA 聚合酶的 5’→3’外切核酸酶活性会将探针切断，使荧光基团与淬灭基团分离，从而产生荧光信号。
 
TaqMan 探针常用的标记方式是在寡核苷酸链的 5' 端标记荧光报告基团，3' 端标记淬灭基团。以下为详细介绍：

5' 端标记荧光报告基团：
·  常见的有 FAM（6 -羧基荧光素）、VIC 等。FAM 的激发波长约为 495nm，发射波长约为 520nm，荧光信号强且稳定，常用于多种荧光检测技术中。VIC 的光谱特性与 FAM 不同，可在多重 PCR 检测中与 FAM 等其他荧光基团同时使用，实现对多个目标基因的同时检测。

3' 端标记淬灭基团：
·  传统的淬灭基团如 TAMRA（6 - 羧基四甲基罗丹明），其吸收光谱与荧光报告基团的发射光谱有较好的重叠，能有效淬灭荧光报告基团的信号。在 TaqMan 探针中，当探针完整时，由于 5' 端荧光报告基团与 3' 端淬灭基团距离较近，发生荧光共振能量转移（FRET），荧光报告基团发出的荧光被淬灭基团吸收并以热的形式散发，检测不到荧光信号。而在 PCR 扩增过程中，Taq 酶的 5' - 3' 外切酶活性会将结合在模板上的 TaqMan 探针切断，使荧光报告基团与淬灭基团分离，荧光报告基团不再受淬灭基团的影响，从而发出荧光，其荧光信号强度与 PCR 产物的量成正比，可通过荧光检测仪器进行实时监测。
常用组合：5' 端FAM，3' 端TAMRA；激发波长约为 495nm，发射波长约为 520nm；

5' 端VIC，3' 端TAMRA；
    5' 端FAM，3' 端TAMRA；FAM（6 - 羧基荧光素）：激发波长约为 495nm，发射波长约为 520nm，荧光颜色为绿色。在 TaqMan 探针检测中，FAM 标记的探针产生强而稳定的绿色荧光信号，常用于单一目标基因的检测。
    5' 端VIC，3' 端TAMRA；VIC：激发波长约为 538nm，发射波长约为 554nm，荧光颜色为黄色。VIC 的光谱特性与 FAM 不同，常被用于多重 PCR 检测中，可与 FAM 等其他荧光基团同时使用，实现对多个目标基因的同时检测，其黄色荧光信号可与 FAM 的绿色荧光信号明显区分。
     5' 端ROX，3' 端TAMRA；ROX（6 - 羧基 - X - 罗丹明）：激发波长约为 570nm，发射波长约为 590nm，荧光颜色为红色。ROX 通常作为参比荧光用于校正荧光信号的强度，以消除实验过程中由于加样量、反应体积等因素引起的误差，确保检测结果的准确性。在一些 TaqMan 探针试剂盒中，会将 ROX 与 PCR Master Mix 混合，为整个反应提供一个稳定的内参荧光信号。
此外，还有一些改进的淬灭基团，如 Black Hole Quencher（BHQ）系列等，具有更高的淬灭效率和更低的背景荧光，能进一步提高 TaqMan 探针检测的灵敏度和准确性。
然而，除了 TaqMan 探针外，还有其他类型的双标记荧光探针。
 
分子信标探针:
分子信标探针也是一种双标记荧光探针，它在 TaqMan 探针的基础上进行了改良，在寡核苷酸与基团的连接处各增加了 5 - 6 个互补碱基，形成一个发卡结构，使荧光基团与淬灭基团靠近并淬灭荧光信号。当探针与靶序列结合后，分子信标的空间构型发生改变，荧光分子和猝灭分子之间的距离增大，荧光恢复，从而实现对靶序列的检测。
 
双杂交探针:
双杂交探针:（也称为 LightCycler 或 FRET 探针）由两条特异性探针组成，这两条探针是与模板互补且相邻的序列，其中上游探针的 3’端标记有供体荧光基团，下游探针的 5’端则标记有受体荧光基团。
双杂交探针是单标探针，不是双标探针。
两条探针分别标记荧光供体基团和荧光受体基团，两基团的激发光光谱有一定的重叠。杂交位置要求：两条探针与靶核酸的杂交位置相互邻近，通常距离在1~10 nm（一般为1~5个碱基）
 
双杂交探针常用的荧光基团有很多种，以下是一些常见的供体和受体荧光基团组合：
   双杂交探针的供体基团（3’端），受体基团（3’端）；

FAM - TAMRA
供体：
FAM（6 - 羧基荧光素）作为供体荧光基团，具有较高的荧光量子产率和良好的水溶性，其激发波长约为 495nm，发射波长约为 520nm。
受体：
TAMRA（6 - 羧基四甲基罗丹明）作为受体荧光基团，激发波长约为 555nm，发射波长约为 580nm。FAM 的发射光谱与 TAMRA 的激发光谱有一定重叠，当两者距离合适时，能有效发生荧光共振能量转移（FRET）。

HEX - Cy3
供体：
HEX（六氯 - 6 - 羧基荧光素）是供体，激发波长约为 535nm，发射波长约为 556nm，荧光强度较高。
受体：
Cy3 是一种常用的受体荧光基团，激发波长约为 550nm，发射波长约为 570nm。HEX 发射的荧光能够有效地激发 Cy3，实现能量转移，产生可检测的荧光信号。

部分核酸探针的应用场景：
以下是这些修饰在不同场景中的应用：
核酸结构与功能研究：
2 - Aminopurine：常被用于研究核酸的结构和动力学。它可以替代腺嘌呤（A），由于其荧光特性，能够提供关于核酸折叠、碱基配对以及与蛋白质相互作用等方面的信息。
5 - Bromo dU：可替代胸腺嘧啶（T），其较大的溴原子会影响核酸的结构和稳定性，通过引入该修饰，可研究核酸结构变化对其功能的影响。同时，它也是一种常用的细胞增殖标记物，可通过免疫荧光等方法检测掺入该修饰的细胞，从而研究细胞的增殖情况。
8 - OX - dG：是一种氧化损伤的鸟嘌呤类似物，研究其在核酸中的存在和位置，有助于了解氧化应激对 DNA 的损伤机制以及与衰老、疾病（如癌症）等过程的关系。

核酸探针与检测技术：
int 6 - FAM - dT、int HEX - dT、int ROX - dT、int TAMRA - dT、int TET - dT、int Texas Red - dT、int Cy5 - dT、int Cy3 - dT：这些带有荧光基团修饰的 dT，常用于核酸探针的制备。如在荧光定量 PCR、荧光原位杂交（FISH）等技术中，通过荧光信号的变化来检测目标核酸的存在、含量及分布情况。不同的荧光基团具有不同的发射波长，可实现多重检测，即在同一反应体系中同时检测多个不同的目标核酸。
int BHQ1 - dT、int BHQ2 - dT：BHQ 系列是淬灭基团，与荧光基团搭配使用于荧光探针中，如 TaqMan 探针。当探针完整时，荧光基团与淬灭基团距离近，荧光被淬灭；当探针被核酸酶切割或与目标核酸杂交后发生构象变化，使荧光基团与淬灭基团分离，荧光恢复，从而实现对核酸的定量检测。

核酸药物研发：
5 - Aza - 2` - deoxycytidine：是一种 DNA 甲基转移酶抑制剂，可用于治疗一些与 DNA 甲基化异常相关的疾病，如血液系统恶性肿瘤等。它通过掺入到 DNA 中，抑制 DNA 甲基转移酶的活性，从而改变基因的甲基化状态，进而调控基因表达。
Pyrrolo - dC：可能具有独特的碱基配对特性或生物活性，在核酸药物设计中，可作为一种特殊的碱基类似物，用于开发具有新型作用机制的核酸药物，如反义寡核苷酸、小干扰 RNA（siRNA）等，以实现对特定疾病相关基因的靶向调控。

基因表达调控研究：
1 - Me - dA：甲基化修饰的腺嘌呤，可能影响 DNA 与蛋白质的相互作用，进而影响基因的转录调控。研究其在基因组中的分布和功能，有助于揭示基因表达的表观遗传调控机制。

核酸与蛋白质相互作用研究：
int Biotin - dT：生物素可以与链霉亲和素等蛋白质特异性结合，通过在核酸中引入生物素修饰，可利用生物素 - 链霉亲和素系统，将核酸与蛋白质进行特异性捕获或固定，从而研究核酸 - 蛋白质复合物的组成、结构和功能，例如在染色质免疫沉淀（ChIP）技术中用于富集与特定蛋白质结合的 DNA 片段。
int Dig - dT：地高辛修饰的 dT，可通过与地高辛抗体的特异性结合来检测或捕获核酸。常用于核酸杂交实验中，标记核酸探针，然后通过免疫检测方法来定位或定量目标核酸，在基因定位、基因表达分析等研究中具有重要应用。

核酸化学合成与修饰：
C3 Spacer、C6 Spacer、C12 Spacer、Spacer 9、Spacer 18、dSpacer：这些间隔基团常用于在核酸链中引入一段柔性间隔，以便在不影响核酸基本结构和功能的前提下，连接各种修饰基团或实现特定的空间布局。例如，在合成核酸探针时，利用间隔基团将荧光基团或其他功能基团连接到核酸链上，使基团能够更好地发挥作用，同时避免对核酸杂交等反应产生不利影响。
PC - Linker：可作为一种连接子，用于连接不同的核酸片段或在核酸与其他分子（如蛋白质、药物分子等）之间建立连接，为构建复杂的核酸结构或多功能核酸分子提供了可能。
int NH2 - C6 - dT：氨基修饰的 dT，可用于进一步连接其他带有羧基、醛基等活性基团的分子，通过化学反应实现对核酸的功能化修饰，例如连接荧光染料、生物素等，以满足不同实验需求。

其他应用：
int Dithiol、int HS - SH - C6：巯基修饰的 dT，可用于与金属离子或其他含有巯基反应基团的分子发生特异性反应，从而实现对核酸的固定、标记或与其他分子的偶联，在生物传感器、纳米技术等领域有一定应用。
int Methylene Blue - dT：亚甲基蓝修饰的 dT，其具有光吸收和氧化还原特性，可用于光动力学治疗研究或作为核酸结构和功能研究中的光活性探针。
int Azide - dT：叠氮修饰的 dT，可通过点击化学反应与含有炔基的分子发生特异性偶联，为核酸的标记和功能化提供了一种便捷的方法，在化学生物学和药物研发等领域有广泛应用。
int CHCH - dT、int DBCO - dT：这类修饰可参与特定的化学反应，如 DBCO（二苯并环辛炔）可与叠氮基团发生无铜点击反应，用于核酸的标记、成像及与其他生物分子的偶联等。
int Symmetric：对称修饰可能是指在核酸链上进行对称位置的修饰，具体作用需根据具体的修饰内容和实验背景来确定，可能与核酸的稳定性、折叠结构以及与其他分子的相互作用等有关。
 

LNA（Locked Nucleic Acid，锁核酸）是一种经过修饰的核酸类似物，LNA - dA、LNA - dG、LNA - dC、LNA - dT 分别是包含锁核酸修饰的腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶的单体。基于这些单体构建的 LNA 探针有以下常见应用场景：
 
LNA（Locked Nucleic Acid，锁核酸）探针是一种经过特殊修饰的核酸探针，具有独特的结构和优异的性能，广泛应用于分子诊断和基因检测中。以下是关于LNA探针设计、原理和应用的详细介绍：

LNA探针的设计
结构特点

• LNA是一种含有桥接双环糖基的合成核酸类似物。其核糖的2'-O和4'-C之间通过亚甲基桥相连，形成刚性的双环结构，这种结构限制了核糖环的灵活性，使其更稳定。
• LNA探针遵循Watson-Crick碱基配对规则，可以与互补的DNA或RNA序列杂交。

  设计要点

• 提高Tm值：LNA探针能够显著提高与靶序列结合的热稳定性。每加入一个LNA核苷酸，Tm值可升高2~8℃。因此，LNA探针可以设计得更短，同时对序列的GC含量依赖性更低。
• 增强特异性：LNA探针能够显著提高完全匹配和错配碱基之间的Tm值差异，从而更有效地分辨单核苷酸多态性（SNP）。
• 灵活性：LNA可以与标准寡核苷酸合成相容，可以直接将单个或多个LNA核苷酸位点选择性地掺入探针序列中，以调整探针的识别能力和Tm值。

LNA探针的原理

• LNA探针通过与目标核酸序列的互补杂交实现检测。其特殊的双环结构使其与目标序列的结合更稳定、更特异。
• 在qPCR等应用中，LNA探针的高Tm值和特异性减少了非特异性结合的背景荧光，提高了信噪比。

LNA探针的应用
基因检测
·  SNP检测：LNA探针能够有效区分单碱基突变，适用于单核苷酸多态性（SNP）检测。
·  等位基因鉴别：在等位基因扩增阻滞原理（ARMS）中，LNA探针可提高引物的特异性，用于检测低频率突变。
·  病原体检测

• LNA探针可用于检测病毒、细菌等病原体的核酸序列，具有高灵敏度和特异性。

·  基因表达分析

• LNA探针可用于实时荧光定量PCR（qPCR），提高基因表达分析的准确性和灵敏度。

·  多重检测

• LNA探针的高Tm值和特异性使其适用于多重qPCR检测，能够同时检测多个靶标。

·  反义技术

• LNA的高核酸酶抗性和强结合亲和力使其成为反义技术的理想选择，可用于基因沉默和microRNA检测

LNA探针凭借其独特的结构和优异的性能，已成为分子诊断和基因检测中的重要工具。其高特异性和高灵敏度使其在多种应用中表现出色，为科学研究和临床诊断提供了有力支持
 
以下是连接类探针的类型及其应用场景：
1. Triple SH（三巯基）探针
应用场景：

• 纳米材料修饰：可用于修饰金纳米颗粒（AuNPs），巯基与金表面结合，形成稳定涂层，可用于生物传感器、光热治疗等领域。
• 生物分子标记：可用于标记蛋白质、核酸等生物分子，通过与生物分子上的特定基团反应，实现对生物分子的标记和检测。
  

 
2. Maleimide（马来酰亚胺）探针
应用场景：

• 蛋白质标记与追踪：可与蛋白质中的半胱氨酸残基的巯基（-SH）快速共价结合，用于标记和追踪蛋白质在细胞或组织中的分布。
• 活细胞成像：适用于活细胞成像，其红色荧光信号可以穿透细胞样品并减少光损伤。
• 细胞器标记：可用于标记特定的细胞器，如线粒体、内质网等，研究细胞器的结构和功能。
• 药物筛选：可用于评估药物对蛋白质或细胞器的影响。
• 化学探针开发：可用于开发新型化学探针，研究生物分子之间的相互作用。

 
3. Azide（叠氮）探针
应用场景：

• 生物正交反应：常用于生物正交点击化学反应，与炔基（-C≡C-）或环辛炔等基团发生反应，用于标记和检测生物分子。
• 蛋白质和核酸标记：可用于标记蛋白质、核酸等生物分子，实现对生物分子的定位和功能研究。

4. CHCH（炔基）探针
应用场景：

• 生物正交反应：与叠氮基团发生点击化学反应，生成稳定的三唑环，用于生物分子的标记和检测。
• 生物成像：可用于生物成像，标记生物分子后通过荧光成像技术观察其在细胞或组织中的分布。

5. DBCO（二苯并环辛炔）探针
应用场景：

• 生物正交反应：与叠氮基团发生快速、高选择性的点击化学反应，用于标记和检测生物分子。
• 生物分子追踪：可用于追踪生物分子在细胞内的动态变化。

 
6. COOH（羧基）探针
应用场景：

• 生物分子偶联：可通过化学反应与生物分子上的氨基（-NH2）等基团结合，实现生物分子的标记和偶联。
• 药物递送系统：可用于构建药物递送系统，将药物与生物分子或纳米材料连接。

7. Acrydite（丙烯酰胺）探针
应用场景：

• DNA测序：可用于DNA测序中的引物修饰，提高测序的准确性和效率。
• 生物传感器：可用于构建生物传感器，检测特定的生物分子。

8. Hydrazine（肼）探针
应用场景：

• 生物分子标记：可用于标记生物分子，通过与生物分子上的醛基（-CHO）或酮基（-CO）反应，形成稳定的共价键。
• 荧光探针开发：可用于开发荧光探针，用于生物成像和检测。

 
9．连接类探针CHO
应用场景：

• 生物分子标记：可用于标记生物分子，通过与生物分子上的肼基（-NH-NH2）或氨基（-NH2）反应，形成稳定的共价键。