western blot 原理:
免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。
BioTNT western blot 技术优势：
1、BioTNT关于wb实验完整的产品线，从相关耗材到试剂，涵盖wb全部实验相关产品。
2、BioTNT通过对样本进行蛋白定量，内参控制等方法严格均一化各样本蛋白量，真实呈现蛋白表达差异性；
3、BioTNT拥有多年的Western Blot检测经验，为客户提供专业的技术服务和全套的western blot 解决方案。
BioTNT Western blot 实验流程：
1、蛋白提取和定量（如果提供蛋白样品，则直接电泳预实验检测抗体特异性）；
2、SDS-PAGE 10-15% 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；
3、转膜（PVDF膜）；
4、封闭（5%脱脂奶粉）；
5、一抗孵育（其中内参基因为Tubulin、GAPDH或Actin）；
6、二抗孵育（如果由于材料降解或一抗造成实验无法继续，则收取相关预实验费用）；
7、显色（ECL）；
8、曝光、洗片、分析。
客户western blot 样本要求：
您只需要提供
1、样本量：组织样本，质量大于100mg；细胞样本，细胞数大于1×106；
2、您可自备一抗，也可让我公司代买，为保证质量，抗体好为进口单克隆或多克隆抗体；
3、服务时限和内容：收到样本之日起15-20个工作日内提交实验结果，具体包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、胶片，图片及相关分析数据等；
4、报告送达：实验结果将以电子或书面形式提交给您。
温馨小贴士
样本制备及注意事项:
悬浮细胞： 取大约 1×107个细胞，低速离心收集，弃去培养液，加入1ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70℃ 冰箱保存。干冰运输。
贴壁细胞：取大约1×107个贴壁细胞，胰酶消化后加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体，加入 1 ml PBS悬浮细胞，转入小离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去PBS，放入-70℃冰箱保存。干冰运输。
组织：采集新鲜组织（注意：生物体死亡后10分钟内取材料并保存好），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块，放入液氮或-70℃冰箱中保存，干冰运输。
Western Blotting 收费标准：
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蛋白类型
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样本类型
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收费标准
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非磷酸化实验
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磷酸化实验
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总蛋白
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细胞
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40/样
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40/样
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肝、脑等组织
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40/样 |
40/样 |
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心、肌肉等组织
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40/样 |
40/样 |
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上皮、眼角膜、膀胱等
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60/样
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60/样
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神经节、结缔组织等
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60/样
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60/样
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其他样本
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询价
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询价
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核蛋白
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需购买相关试剂盒
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100/样
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130/样
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2、Western Blotting 实验费用：整膜按照裁膜的1.5倍收取。样本少于5个，裁膜按照500一张收取；
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蛋白类型
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蛋白分子量
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收费/膜
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蛋白类型
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蛋白分子量
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收费/膜
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非磷酸化蛋白（裁膜）
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30-90kDa
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900元
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磷酸化蛋白（裁膜）
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30-90kDa
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900元
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90kDa-240kDa
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1100元
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90kDa-240kDa
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1100元
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240kDa-350kDa
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1300元
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240kDa-500kDa
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1300元
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10kDa -30kDa
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1100元
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10kDa -30kDa
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1100元
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小于10kDa
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1300元
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小于10kDa
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1300元
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可以微信咨询。