BioTNT 甲基化检测技术服务
DNA突变会导致表型改变。然而，序列不变化，基因调控照样能发生，这就是表观遗传学的威力。DNA甲基化是表观遗传学中的重要组成部分，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育中起着重要作用，也与多种癌症密切相关。
脊椎动物的DNA甲基化通常发生在CpG岛中的胞嘧啶。CpG岛是CpG二核苷富集区域，GC含量大于50%，长约200-500 bp。甲基化是由DNA甲基转移酶所催化的，将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶（5mC）。这样一个简单的生化反应却有着意想不到的严重后果。许多重要的过程如胚胎发育和细胞周期调控都与甲基化息息相关，而多个癌症也表现出异常的甲基化模式。甲基化的存在就像一个开关，在不需要基因表达的时候将基因的活性关闭；去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。
5-羟甲基胞嘧啶5-hydroxymethylcytosine（5-hmc）的分子式是C5H7N3O2，是5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)的羟基化形式，5-羟甲基胞嘧啶是TET家族的酶通过氧化5-甲基胞嘧啶（5-mC）产生的，被称为“第六种碱基”，可以调控基因表达的关闭，是一种重要的表观遗传修饰，可能与去甲基化过程有关，5-羟甲基胞嘧啶的具体作用机制还不明确。
甲基化是蛋白质和核酸的一种重要的修饰，调节基因的表达和关闭，与癌症、衰老、老年痴呆等许多疾病密切相关，是表观遗传学的重要研究内容之一。 常见的甲基化修饰有DNA甲基化和组蛋白甲基化。
由于普遍认为DNA甲基化在多种疾病尤其是癌症中扮演着重要的角色，所以人们对表观遗传学研究寄予厚望，希望能从中发现新的诊断和治疗的生物标志物。
DNA甲基化研究的经典方法：亚硫酸盐处理后进行一代测序：
样本的采集和稳定，基因组DNA 纯化，亚硫酸氢盐转化及CpG位点的甲基化检测。
后期检测为： 亚硫酸盐测序；
2.1 亚硫酸盐测序：
实验步骤：
l 基因组DNA的提取；
l BSP实验亚硫酸盐处理及纯化（QIAGEN，cat：59824）
l 引物的设计（加粗斜体下划线部分为引物位置,红色字体区域为检测区域）PCR产物
l PCR扩增；反应程序
l T/A克隆与测序：PCR产物纯化，连接T载体，转化酶切法鉴定阳性菌落，挑取质粒送测序（10个克隆）；
l 实验结果：
1. DNA 质量鉴定，Nano 数据，
2. DNA 完整性电泳图片；
3.PCR 产物电泳图片；
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4.测序分析结果：
