进入中文网站 Into the English website
您好,欢迎光临BioTNT生命科学世界
[登录]  [用户注册]
生命科学网址导航 | 登陆 | BioTNT公众号 | BioTNT视频号 | 小T商城 | BioTNT生物商城 | 人才召集    

BioTNT公众号

BioTNT视频号

小T商城

如何快速查询产品?
分子生物学试剂
检测试剂盒
抗体/蛋白/蛋白分析
细胞实验试剂
生化试剂
微生物实验试剂
常规耗材
细胞培养耗材
其他试剂
分子生物学耗材
其他耗材
移液器
样本处理
ELISA
PCR
Western Blotting
其他技术服务
品牌产品精选
其他仪器
下载专区
实时定量PCR Array技术服务
mRNA Realtime qPCR (实时荧光定量) 实验服务
蛋白芯片 Antibody Arrays 系列服务
microRNA qPCR 实验服务
ELISA 技术实验服务
Western Blotting 技术服务
蛋白芯片 技术服务(一)
BioTNT 甲基化检测技术服务
基因分型技术(SNP)服务和产品解决方案
生化/其他试剂盒检测服务
更多 >>
更多 >>
 
技术宝典— ELISA
BioTNT ELISA 03 ------ 实验准备及注意事项

ELISA实验的事前准备工作一

 

1.         确定有进行ELISA实验重要的仪器:

酶标仪;

 

2.         确定实验动物种属和ELISA检测指标:

查找文献,根据临床意义,确定要用的实验动物种属(如大鼠、小鼠、豚鼠、兔、猪、狗等)和用ELISA方法检测的实验指标(如白介素,生长因子,激素等);

 

3.         确定要搜集的标本类型:

如血清、抗凝血浆、肺泡灌洗液、脑脊液、尿液、关节华液、组织匀浆、细胞培养上清液等;

 

4.         确定要收集的标本数量:

用以确认需要采购检测试剂盒的数量;

 

5.         确定标本的处理方法:

根据所采购的检测试剂盒说明书,确定不同类型标本的正确处理方法;

 

6.         确定要收集的标本体积;

合理分组,根据实验模型,确定要收集的标本体积;

 

7.         确定购买试剂盒的厂家和试剂盒类别:

根据适用于要检测的标本的相应规格的ELISA试剂盒的灵敏度、检测范围、价格和到货期等情况来确定检测试剂盒的品牌厂家和类别;

 

8.         确定要购买的试剂盒的规格和数量:

根据标本数量,确定要购买的试剂盒的规格和数量,同时了解试剂盒的整盒有效期和拆开包装後的有效期(各主要成分的开瓶有效期),降低实验风险;

 

9.         确认实验复孔:

为了增加结果的可靠性,对标准曲线和标本,要求做双复孔或者三复孔,就是同一份标本,平行做两次或者三次。如果本身试剂盒的稳定性好,而又不要求每个数据的绝对准确,主要目的是为了统计学意义的话,可以选择做双复孔或者是单孔。

 

10.     确定时间的合理安排:

主要确定标本的采集时间,根据采集时间来安排标本的保存条件、何时进行试剂盒的购买、如何进行预实验的安排、如何进行大批量标本的检测:如果标本采集时间过长,如超过六个月,请把标本放在-70度或者液氮罐中保存;在基本上收集完标本的前一个月,进行试剂订购。一般国外试剂的到货期长一个月,有足够的时间来等待试剂盒的来到。到货後,取几个样品(少两个,估计的低值和高值)和标准品来进行预实验。预实验成功後才能进行大批量标本的实验。

 

注:因为每个试剂盒可能都经过长途运输,运输途中可能会导致试剂盒失效,所以预实验是必不可少的,这样才能保证试剂盒没有问题,而且一旦有问题可以快速得到解决,且不用浪费自己辛苦收集的标本。

 

 

ELISA实验的事前准备工作二

 

确认ELISA实验需要但试剂盒中未提供的材料:

 

1.       可在试剂盒要求得波长处进行读数的酶标仪;

2.       水浴箱或者是恒温箱(空气浴);

3.       能精确吸取10-200µL的移液器;

4.       可调多道(8)移液器(50200µL);

5.       供可调多道移液器使用的试剂存放槽;

6.       洗瓶或洗板机;

7.       蒸馏水或去离子水;

8.       1升的圆柱形量筒;

9.       移液器:1和(1025 mL);

10.   移液器枪头;

11.   纸巾;

12.   计时器,用以监控温育步骤;

13.   处理池和消毒剂(例如:0.5% 次氯酸钠, 10% 家用漂白水);

 

 

其中需要注意的是:

 

1.       在实验进行前,需要确认酶标仪在恰当波长能够正常读数,且能正常打印;

2.       用一支温度计来测量使用的温育设备(水浴箱或者是恒温箱),温控是否精确;因为随着仪器的老化,上面的控温不一定准确,所以需要测量一下实际温度;

3.       对移液器,也就是加样器进行校正;确保加样准确。

 

 

ELISA实验的进行(预实验):

 

1.       仔细阅读试剂盒的说明书和注意事项;

2.       这一阶段对加样要求不高,主要是熟悉整个操作,验证试剂盒,明确标本是否可以检测出来。

3.       相信做过一次预实验以后,即使是从来没有做过ELISA实验的人,也会信心大增的。

4.       根据预实验反馈的几种结果来确定是进入下一步:大批量实验,还是重新进行预实验。只有预实验结果是好的,成功的时候,才能进入下一步。

 

 

预实验反馈的几种结果:

 

I.           预实验结果:

定量检测中,如果标准曲线正常,标本值落在高点和低点之间,则认为预实验结果是好的,成功的。

 

II.          不好的预实验结果:

A.         定量检测中,标准品如果不显色,请查看自己的操作是否有问题;若非操作问题,则有可能是标准品失效,请与厂家联系,是再做一次,还是返回厂家由厂家来解决;

B.         定量检测中,标准品正常显色,但标本没有显色;这时有两种情况:

1.         标本中某些指标含量很低,会出现这种情况;可以通过修改某些操作步骤来达到提高灵敏度;或者通过超滤的方法来浓缩标本,可以使标本能检测出;也可以通过更换更灵敏的试剂盒来达到这个目的。

2.         动物品系问题导致,要检测的指标与试剂盒中包被的抗体不同,可能会导致检测不出。

 

 

ELISA实验的进行(大批量标本的实验):

 

与预实验不同的是,正式实验增加了对加样的要求,要求加样迅速、准确。

产品咨询:sales@biotnt.com    BioTNT订阅号:
ELISA、蛋白芯片、荧光定量PCR、PCR ARRAY--BioTNT 科研好助手
首页 | 关于BioTNT | 联系我们|  
沪公网安备

沪公网安备 31011202008058号


沪ICP备11033708号-1

BioTNT 小T商城

扫码进入BioTNT 小T商城

小T商城
产品搜索说明:
 
1. 搜索产品时先要选择搜索条件:品名搜索和货号搜索,搜索到产品列表时,可根据产品类别和品牌进行一次筛选;
2. 由于某些产品的英文名较多,可更换关键词搜索;
3. 当进行品名搜索时,切勿将品名和种类同时输入,否则就有可能搜索不到产品(例如:FAST Frame for Chip Kits - 4 Slide frame 生物芯片,将有可能搜索不到产品或者过多的产品);
4. 如果您需求的产品比较急时,可联系在线客服,即时为您提供更便捷的服务。
>