磷酸基团，氨基基团和空间子基团修饰的应用场景见下面：

磷酸基团 Phosphorylation/5'-Phosphorylation 和磷酸基团 Phosphorylation/3'-Phosphorylation

• 5'-Phosphorylation：在 DNA 连接反应中，5' 端磷酸基团是连接酶作用的关键位点，可使 DNA 片段之间通过磷酸二酯键相连，常用于基因克隆、DNA 文库构建等。还可用于激酶活性检测实验，通过检测底物 5' 端磷酸化水平来反映激酶的活性。
• 3'-Phosphorylation：可以防止核酸外切酶从 3' 端对核酸进行降解，增加核酸分子的稳定性。在一些 DNA 测序方法中，3' 端磷酸化修饰可用于阻止 DNA 链的延伸，从而实现对特定碱基位点的测序分析。

氨基基团 Amino/5'-Amino、氨基基团 Amino/3'-Amino 和氨基基团 Amino/5'-NH? C??

• 5'-Amino 和 3'-Amino：氨基基团可用于连接各种报告基团或功能性分子，如荧光染料、生物素等，从而实现对核酸分子的标记和检测。此外，氨基修饰还可用于与固相载体表面的活性基团发生反应，将核酸固定在载体上，用于核酸杂交芯片、亲和层析等实验。常用5端C6-NH2。
• 5'-NH? C??：长链的 C??氨基修饰可以增加核酸分子与其他分子之间的距离，减少空间位阻，使标记或连接的分子能够更自由地发挥作用，常用于需要避免空间干扰的生物检测或分子相互作用研究中。

空间子 Spacers/Spacer C?、空间子 Spacers/Spacer 9 和空间子 Spacers/Spacer 18

• Spacer C?、Spacer 9 和 Spacer 18：主要作用是在核酸分子与连接的功能基团之间提供一定的空间间隔，减少空间位阻，使功能基团能够更好地与目标分子相互作用。不同长度的空间子可根据具体实验需求进行选择，例如在荧光定量 PCR 中，合适长度的空间子可以使荧光基团和淬灭基团之间的距离恰到好处，提高检测的灵敏度和准确性。

巯基基团 Thiolation/5'-SH C?、巯基基团 Thiolation/3'-SH C?（3’-SH C?）、巯基基团 Thiolation/3'-diThiol和巯基基团 Thiolation/3'-diThiol即 DTPA

• 5'-SH C?和 3'-SH C?（3’-SH C?）：巯基可以与金、银等金属表面发生特异性结合，常用于将核酸固定在金属纳米颗粒或金属电极表面，构建生物传感器用于检测生物分子。此外，巯基之间还可以形成二硫键，用于核酸分子的交联或与其他含巯基的分子进行偶联反应。
• 3'-diThiol和 3'-diThiol即 DTPA：DTPA 是一种多齿配体，具有很强的金属离子螯合能力。3'-diThiol * 修饰的核酸可以通过 DTPA 与放射性金属离子或稀土金属离子等进行螯合，用于放射性标记或荧光标记，在核医学成像、生物分子追踪等领域有重要应用。

生物素 Biotin/5'-Biotin、生物素 Biotin/5'-Biotin TEG、生物素 Biotin/3'-Biotin 和生物素 Biotin/3'-Biotin TEG

• 5'-Biotin 和 3'-Biotin：生物素可以与链霉亲和素或亲和素特异性结合，这种特异性结合具有很高的亲和力和稳定性。因此，生物素修饰的核酸可用于亲和纯化、免疫检测、原位杂交等实验，通过与标记有荧光素、酶等的链霉亲和素或亲和素结合，实现对核酸分子的检测和定位。
• 5'-Biotin TEG 和 3'-Biotin TEG：TEG（四乙二醇）是一种亲水性的间隔臂，可增加生物素与核酸之间的距离，减少空间位阻，提高生物素与链霉亲和素的结合效率，同时增强核酸在水溶液中的溶解性和稳定性，常用于需要高效结合和稳定检测的生物分析实验中。

地高辛 Digoxin/5'-Digoxin 和地高辛 Digoxin/3'-Digoxin

• 5'-Digoxin 和 3'-Digoxin：地高辛是一种半抗原，可被地高辛特异性抗体识别。地高辛修饰的核酸可用于核酸杂交实验、原位杂交等，通过与地高辛抗体结合，再利用标记有荧光素、酶等的二抗进行检测，从而实现对特定核酸序列的定位和定量分析，尤其在病毒检测、基因定位等方面有重要应用。

Inverted dT/3'-Inverted dT

• 3'-Inverted dT：常用于构建 DNA 发夹结构或作为核酸分子的末端保护基团。由于其结构与正常的 DNA 链方向相反，可阻止核酸外切酶对 3' 端的降解，增加核酸分子的稳定性。同时，在一些核酸适配体的设计中，Inverted dT 可以改变核酸的空间构象，影响其与靶分子的结合特异性和亲和力。

ddC/3'-ddC

• 3'-ddC：是一种双脱氧胞苷，在 DNA 测序中，它可以作为链终止剂。由于其 3' 位没有羟基，不能与下一个核苷酸形成磷酸二酯键，从而使 DNA 链的延伸在特定位置终止，通过对不同长度的终止片段进行电泳分离和检测，可确定 DNA 的序列。此外，在一些抗病毒药物的研发中，ddC 类似物可作为核苷酸类似物抑制剂，抑制病毒 DNA 的合成，从而发挥抗病毒作用。