IF 44.8 |BioTNT助力生物医疗研究：用于神经元FAM171A2介导α-突触核蛋白纤维摄取并驱动帕金森病
2025年2月，复旦大学上海医学院附属华山医院神经内科、国家神经系统疾病临床医学研究中心、医学神经生物学国家重点实验室、教育部脑科学前沿中心共同在国际期刊《Science》上发表的，题为“Neuronal FAM171A2 mediates a-synuclein fibril uptake and drives Parkinson’s disease”的论文。吴凯敏，徐倩慧，刘奕琦，冯一苇，韩思达，张雅儒，陈仕东，郭宇，吴邦胜，马灵芝，张毅，陈一林，杨刘洋，杨赵飞，肖玉洁，王婷婷，赵珏，陈淑芬，崔梅，陆博勋，乐卫东，舒友生，叶克强，李佳一，李文生，王建等为作者。刘聪，袁鹏，余金台为通讯作者。
背景：帕金森病（PD）是一种影响运动和认知功能的神经退行性疾病。病理性 α- 突触核蛋白（α-syn）在大脑各个区域的聚集，是导致这种疾病进展的重要因素。聚集的 α-syn 蛋白形成纤维，以类似朊病毒的方式，在大脑的不同区域传播 α-syn 病理变化。然而，α-syn 在神经元之间传递的分子机制仍然不为人知。以往的研究表明，病理性 α-syn 通过内吞作用进入细胞，并且涉及不同的受体；但神经元上的特异性受体尚未完全明确。我们之前的研究发现，FAM171A2 的单核苷酸多态性 rs708384 与 PD 风险增加有关。PD 患者脑脊液（CSF）中 FAM171A2 的含量会增加，并且与大脑中高 α-syn 聚集的指标相关。
主要研究信息：在本研究中，假设 FAM171A2 可能参与了 α-syn 病理变化在神经元之间的传播。我们通过使用 α-syn 病理传播的小鼠模型，系统地验证了这一假设。我们明确了 FAM171A2 表达与神经元摄取 α-syn 纤维以及其下游神经毒性之间的因果关系。通过生物化学和结构学方法，我们揭示了 FAM171A2 与 α-syn 相互作用的生物物理学基础。此外，我们还发现一种小分子 bemcentinib，在培养细胞和体内实验中都能阻断这种相互作用。总之，我们的数据表明，FAM171A2 是 α-syn 纤维内化的特异性介质，抑制这种相互作用可能是对抗 PD 中 α-syn 传播的一个治疗靶点。
使用产品情况：IK-1011 Anti DYKDDDDK免疫（共沉淀试剂盒，包含足够完成40个反应的试剂，每个反应使用25µL磁珠。能够高效完成抗原免疫沉淀（IP及免疫共沉淀CoIP）实验。试剂盒中提供Biolinkedin® Anti DYKDDDDK磁珠可以实现快速便捷的抗原磁性分离。免疫共沉淀试剂盒配有经过优化预制的缓冲液，为免疫沉淀实验提供了最佳的反应条件，增强了免疫沉淀实验的稳定性。本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。
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产品货号
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产品名称
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产品包装
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IK-1011
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40T/Kit
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总结：
帕金森病（PD）中，病理性 α- 突触核蛋白（α-syn）纤维的神经元积累和传播是关键病理过程，但 α-syn 纤维摄取的神经元机制不明。研究发现，FAM171A2 是影响 α-syn 聚集的 PD 风险基因，其表达与 PD 患者大脑中 α-syn 聚集相关，过表达促进 α-syn 纤维内吞、加剧病理传播和神经毒性，敲低则有保护作用。FAM171A2 细胞外结构域 1 通过静电力与 α-syn C 末端结合，对纤维的选择性超千倍。此外，bemcentinib 可阻断 FAM171A2 与 α-syn 纤维的相互作用，有望成为对抗 PD 中 α-syn 传播的潜在治疗靶点。
免疫共沉淀：
为检测FAM171A2与α - syn PFFs的结合情况，在N2a细胞中进行了免疫共沉淀实验。用α - syn PFFs（2μg/ml）处理稳定表达FAM171A2 - FLAG的N2a细胞3小时。孵育结束后，细胞用冷PBS洗涤3次，然后用裂解缓冲液（含50mM Tris（pH 7.4）、150mM NaCl、1% NP - 40和蛋白酶抑制剂）（货号P0013F，中国上海碧云天生物技术有限公司）在冰上裂解30分钟。细胞匀浆在20,000g、4℃条件下离心20分钟，采用BCA法（货号P0010，中国上海碧云天生物技术有限公司）测定上清液的蛋白浓度。取含有500μg蛋白质的样品等分试样，与10μl DynabeadsTM FLAG（货号IK - 1011，上海BioTNT公司，中国），10μl小鼠IgG Dynabeads（货号5873，CST）在4℃孵育过夜，进行α - syn免疫共沉淀实验。在FAM171A2免疫共沉淀实验中，样品先用10μl Dynabeads（货号10007D，美国纽约Invitrogen公司）预清除1小时。同时，将50μl Dynabeads与5μg兔抗α - syn抗体或兔IgG孵育4小时。预清除后的样品与Dynabeads - α - syn抗体/IgG在4℃孵育过夜。免疫沉淀复合物用免疫沉淀缓冲液洗涤3次，加入1×Laemlli缓冲液和β - 巯基乙醇后煮沸5分钟。然后从Dynabeads上分离样品，并通过蛋白质免疫印迹进行进一步分析。