大鼠5-羟色胺 elisa

小鼠5-羟色胺 elisa

人 5-羟色胺 elisa

其他种属 5-羟色胺 elisa

 

LDN ，Serotonin ELISA（5-羟色胺）Fast Track ，货号BA E-8900， 可以检测人，大鼠，小鼠，各种种属样本中的血清素（5-HT, 5-羟色胺）含量。使用简便，结果准确，是全世界检测serotonin的第一品牌，性价比高！并为多个一线ELISA品牌提供OEM 产品。

BioTNT （上海冠泰生物 www.biotnt.com）作为LDN的中国区代理，这款热销产品Serotonin ELISA（5-羟色胺）Fast Track BA E-8900备现货。

 

货号:	BA E-8900
品名	Serotonin ELISA Fast Track
描述	快速ELISA 定量检测5-羟色胺（血清素）
设计	即用型设计， Acylation in liquid phase. 6 standards, 2 controls
样本用量	25 µl serum, urine, platelets（血清，尿液，血小板）
整体实验时间	乙酰化15 分钟，ELISA 1 h
标准曲线范围	0 / 15 - 2 500 ng/ml
灵敏度	6.2 ng/ml
保存条件	2 - 8 °C
试剂盒规格	96孔
试剂盒优点:	· 整体反应时间. 1h 15 min · 已知药物对反应无影响 ·  不需要稀释，定量范围宽； ·  与其他的方法学相比，关联性好（HPLC）
CE MARK:	是的，通过欧洲CE 认证。

另外，Serotonin Research ELISA（高敏)（5-羟色胺）（人/大鼠/小鼠/各种属通用） BA E-5900可以检测更多类型的样本。

 

BioTNT （上海冠泰生物 www.biotnt.com）作为LDN的中国区代理, LDN 所有组胺产品如下：

 

 

 

Serotonin ELISA （fast track） 说明书

货号： BA E-8900 

 

1. 试剂盒用途和原理：

 

试剂盒可用于血清、尿液和血小板样本中血清素（5-HT, 5-羟色胺）的定量检测。试剂盒可用于大鼠血清素（5-HT, 5-羟色胺），小鼠血清素（5-HT, 5-羟色胺）和人血清素（5-HT, 5-羟色胺），以及其他动物的血清素（5-HT, 5-羟色胺）的检测。

第一步，血清素被定量酰化。随后, 竞争性酶联免疫试剂盒使用微孔板形式。抗原结合在微孔板上，酰化的标准品、对照品和样品以及固相结合的分析物竞争固定数量的抗血清结合位点。系统平衡后，通过洗涤除去游离抗原和游离抗原-抗血清复合物。使用TMB作为底物，通过anti-兔IgG-过氧化物酶复合物检测与固相结合的抗体。酶标仪450nm 读数。

通过已知的浓度的标准品制定标准曲线，未知样品的定量是通过将其吸光度与标准曲线回归进行计算。

 

2.   实验建议

2.1  测试结果的可靠性

 

为了确保对测试结果进行可靠的评估，必须根据所包含的说明以及当前的规则和指南(GLP, RILIBÄK等)进行评估。

在测试过程中，必须特别注意control 的精度和正确性的结果；这些control的结果必须在标准范围内。如果提供的质控报告（pre-set assay）与实际结果之间存在显著差异，请联系试剂盒制造商以获得进一步建议。

建议每个实验室建立自己的参考区间。本测试说明中报告的值仅用于参考。

本试剂盒获得的结果不应被视为任何治疗结果的唯一原因，而必须与其他诊断试验和临床观察相关联。

 

2.2   投诉

 

如有投诉，请向制造商提交一份书面报告，其中包含关于如何进行测试的所有数据、收到的结果以及原始测试打印件的副本。请联系制造商获取表格，并将其完整填写后返还给制造商。

 

2.3   质量保证

 

该试剂盒根据最新技术生产，并经过严格的内部和外部质量控制检查来进行保证。检测试剂盒或检测操作步骤的任何改变以及不同批号试剂的混用可能会对检测结果产生负面影响，因此不在质保范围内。制造商对运输过程中发生的损坏不承担责任。

 

2.4   试剂盒残余物的处理

2.5   干扰

 

不要混合不同批次的试剂和溶液。考虑不同的运输和储存条件，测试样品处理不当，或实验操作不恰当都会影响结果。不要使用过期试剂盒。避免试剂和洗涤水受到微生物污染。温育和洗涤对实验会有影响。

 

2.6   预防措施

 

注意温育和洗涤说明。切勿用嘴吸移，避免试剂和样本与皮肤接触。在处理样品或试剂盒的区域，禁止吸烟、饮食。使用试剂盒或样品时，请务必戴上防护手套，完成工作后立即彻底洗手。避免任何形式的喷洒。避免皮肤接触试剂。使用防护服和一次性手套。所有步骤都必须根据protocol执行。只有使用校准过的移液器，才能获得最佳测试结果。叠氮化钠可能与铅和铜管发生反应，并可能形成高度爆炸性的金属叠氮化物。清理时，用大量水彻底冲洗，以防止这种形成。

本检测试剂盒中包含人或动物血清或血浆的所有试剂均已通过FDA批准的程序检测并确认艾滋病毒I/II、乙型肝炎表面抗原和丙型肝炎病毒呈阴性

然而，所有试剂在使用和处置时都应被视为潜在的生物危害。

 

3.   保存条件和稳定性

 

将试剂(除了酰化试剂(BA E-8912))储存在2-8℃直至过期。酰化试剂应储存在室温下。请勿使用超出标签上标明的过期日的试剂盒组分。

 

4.   试剂盒

4.1  试剂盒成分

 

BA D-0023	反应管*）	2 x 50	准备使用
BA E-0030	Wash Buffer	1 x 20毫升	浓缩，用双蒸水稀释内容物，
	Concentrate		最终体积为1000毫升
BA E-0045	Conjugate	1 x 12毫升	即用型，抗兔IgG偶联
			过氧化物酶
BA E-0055	substrate	1 x 12毫升	即用型，四甲基联苯胺(TMB)
BA E-0080	stop solution	1 x 12毫升	即用型，含0.25M 当量的硫酸
BA E-0931	serotonin-5-HIAA	1x96wells	12条，每条8孔，拆分，预包被
	Microtiter Strips
BA R-8901	标准A	1 x 4毫升	即用型
BA R-8902	标准B	1 x 4毫升	即用型
BA R-8903	标准C	1 x 4毫升	即用型
BA R-8904	标准D	1 x 4毫升	即用型
BA R-8905	标准E	1 x 4毫升	即用型
BA R-8906	标准F	1 x 4毫升	即用型
BA E-8910	Serotonin	1 x 12毫升	兔源，即用型，蓝色管，
	Antiserum		蓝色螺帽
BA E-8911	Acylation Buffer	1 x 55毫升	即用型
BA E-8912	Acylation Reagent	1 x 3毫升	即用型
BA R-8951	Control 1	1 x 4毫升	即用型
BA R-8952	Control 2	1 x 4毫升	即用型

 

*)也可以使用48孔板代替反应管进行样品制备和酰化(请参考6.2)。这些板可根据要求提供(货号BA D -0033)。

 

4.2 需要但试剂盒中没有提供的材料和设备

 

- 可调微量移液器 (e.g. 10-100 µL / 100-1000µL)

- 洗板机

- 可 450 nm 和 620 或 650 nm读数的酶标仪

- 可吸水物 (纸塔)

- 双蒸水

- 混匀器

试剂盒实验时可以振荡温育或者不振荡。如果要振荡，请按照以下参数：shaking amplitude 3mm; approx. 600 rpm.

 

5.   样本采集和保存

 

样本避免反复冻融

血清

溶血样品，尤其是血脂样品，不应用于本试验。

储存:在2-8℃下最多6小时；在-20℃下长期(最长6个月)。

尿

可以使用收集在含有10-15毫升6 M盐酸的瓶中的自发性尿液或24小时尿液。储存:在-20℃下储存更长时间(最长6个月)。避免直接暴露在阳光下。

血浆

超过98%的循环血清素位于血小板中，并在凝血过程中释放。血液必须通过静脉穿刺收集在含有乙二胺四乙酸(EDTA)或柠檬酸盐的塑料管中。

富含血小板的血浆(PRP)

为了获得富含血小板的血浆(PRP)，样品在室温(200g)下离心10分钟。将上清液转移到另一个试管中并计数血小板。

血小板

将800ul 生理盐水加入200ul PRP(包含350，000-500，000血小板/ul)并离心(4，500×g，4℃下10分钟)获得血小板颗粒。然后弃去上清液。

200ul双蒸水加入血小板中，在涡流混合器上充分混合。这种悬浮液可以在<-20℃冷冻储存几周。

冷冻样品解冻后，在室温下以10，000×g离心2分钟。

25 µL上清液用于酰化反应。

注意：对于血小板缺乏血浆和脑脊液中血清素的测定，应使用血清素研究酶联免疫吸附试验(BA E-5900)。

Test procedure for serum, urine and platelets

Allow all reagents and samples to reach room temperature. The measurement in duplicates is recommended.

 

6.   血清、尿液和血小板的测试程序

 

让所有试剂和样品达到室温。建议进行双重复测试。

 

6.1 准备试剂

 

Wash Buffer洗涤缓冲液

用蒸馏水将20毫升Wash Buffer Concentrate稀释至最终体积为1000毫升。

储存:最高6个月2–8℃；

Acylation Reagent酰化试剂

酰化试剂(BA E-8912)的冰点为18.5℃，为了确保酰化试剂在使用时是液体，必须确保酰化试剂达到室温，并在使用前形成均匀、无晶体的溶液。另外，酰化试剂可以在室温(20–25℃)下储存，与其他试剂盒组分分开(请参考3)。

 

6.2血清、尿液和血小板的样品制备和酰化

 

1. 25ul的standards，25ul 的controls，25ul的血清，尿液或血小板样品分别加入相应的反应管中。

2. 加入500ul的Acylation Buffer到每个管中；

3. 加入 25ul 的Acylation Reagent到每个管中；

4. 混合均匀，室温(20-25°C)温育15分钟(20-25°C)。

取25ul 血清素酶联免疫吸附试验的标准品、对照品和样品

 

6.3  Serotonin ELISA

 

shaker（振荡器）的使用不是强制性的。提供没有shaker的替代方案；

1.   向Serotonin Microtiter Strips的相应板条的孔中加入 25 µL 酰化好的标准品，controls 和样品；

2.   加入100 µL 的Serotonin Anti serum 到各个孔中；

3.   在振荡器上孵育30分钟(20-25℃)(大约600转/分)；

不使用振荡器: 用手轻轻摇动旋转微孔板，并在室温(20-25℃)下孵育1小时；

4.   倒掉孔里的液体，用洗液洗板洗三次，每次300ul 洗液每孔。在纸塔上拍干；

5.   加入100 µL的Conjugate到每孔中；

6.   在振荡器上孵育15分钟(20-25℃)(大约600转/分)；

不使用振荡器: 用手轻轻摇动旋转微孔板，并在室温(20-25℃)下孵育15分钟；

7.   倒掉孔里的液体，用洗液洗板洗三次，每次300ul 洗液每孔。在纸塔上拍干；

8.   加入100 µL的底物液到每孔中；

9.   在振荡器上孵育15 ± 2 min (20-25℃)(大约600转/分)；

不使用振荡器: 用手轻轻摇动旋转微孔板，并在室温(20-25℃)下孵育15 ± 2 min；避光；

10.           加入100 µL的Stop solution 到每孔中；振荡微孔板，保证溶液的均匀；

11.           在10分钟内，使用酶标仪450nm读数，设置参比波长为620nm 或650nm；

 

7.   计算结果；

 

		标准品浓度
标准	a	b	c	d		E	F
5-羟色胺（ng/ml）	0	15	50	150		500	2 500
5-羟色胺（nmol/L）	0	85.1	284	851		2 840	14 175
转换:	5-羟色胺（ng/ml）x 5.67=5-羟色胺（nmol/L）

 

校准曲线是通过将标准品（线性，Y轴）的吸光度读数（计算平均吸光度）与相应的标准浓度（对数，X轴）作图而获得的。

 

使用非线性回归进行曲线拟合（例如，样条，4参数，Akima）。

 

尿以及 血清样本可直接从校准曲线读取。

 

血小板中5-羟色胺的计算

血小板中5-羟色胺的含量参考10⁹血小板。

 

说明性示例:

5-羟色胺测定浓度:100ng/ml

PRP中的血小板数:300 000/µL=0.3 x 10⁹血小板/ml，5-羟色胺含量为100ng。

 

血小板中的5-羟色胺含量为:

333纳克/10⁹血小板（100 ng血清素x 1.0 x 10 ⁹/0.3 x 10 ^9）

 

7.1质量控制

 

建议根据州和联邦法规使用质控样品。 在正常和病理水平上使用对照。 试剂盒或其他商用质控品应在规定的置信限内。 试剂盒质控品的置信限打印在QC报告上。

 

7.2校准

 

抗血清与酶偶联物的结合和所用酶的活性是温度依赖性的，如果不使用恒温器，则OD值可能变化。 温度越高，OD值越高。 相应的变化也适用于孵育时间。 酶免疫分析的最佳温度为20-25°C。

 

在溢出的情况下，使用设置为405nm的酶标仪读取器，在10分钟内读取孔中溶液的吸光度

 

7.3典型校准曲线:

示例，请勿用于计算！

 

8.  更多信息见英文说明书：http://www.biotnt.com/file/BioTNTPDF/148@BA%20E-8900.pdf

 

9. 参考文献/文献 

1. Chojnacki, C. 等，肠易激综合征患者5-羟色胺和多巴胺分泌及代谢评估。《波兰内科学文献》，2018年，第128卷第11期，第711–713页。 

2. Huang, H., Z. Chen, 和 X. Yan，两种超声辅助乳化微萃取结合毛细管电泳柱上堆积技术同步测定尿液中5-羟色胺和肌酐。《分离科学杂志》，2012年，第35卷第3期，第436–444页。 

3. Pieš?anský, J., K. Maráková, 和 P. Mikuš，带在线样品制备和环糊精分离环境的二维毛细管电泳直接测定人体尿液中的5-羟色胺。《分子》，2017年，第22卷第10期。 

4. Bieger, W.P.，《神经压力指南》，2011年。 

5. Lindström, M. 等，血清5-羟色胺和血清5-羟基吲哚乙酸LC-MS/MS检测在5-羟色胺分泌型神经内分泌肿瘤诊断中的比较：一项初步研究。《临床化学学报》，2018年，第482卷，第78–83页。 

6. Ren, C. 等，偏头痛患者血清5-羟色胺和氨基酸水平降低的鉴定。《生物化学与生物物理研究通讯》，2018年，第496卷第2期，第267–273页。 

7. Moriarty, M. 等，尿液中5-羟色胺及相关化合物LC-MS/MS分析方法的建立及注意力缺陷多动障碍潜在生物标志物的鉴定。《分析与生物分析化学》，2011年，第401卷第8期，第2481–2493页。 

8. Nichkova, M.I. 等，新型5-羟色胺ELISA检测方法的评估：尿液5-羟色胺作为抑郁症潜在生物标志物的研究。《分析与生物分析化学》，2012年，第402卷第4期，第1593–1600页。 

9. Holck, A. 等，血浆5-羟色胺水平与选择性5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRIs）抗抑郁反应的相关性研究。《情感障碍杂志》，2019年，第250卷，第65–70页。 

如需最新文献或其他信息，请联系当地供应商。

 

10.  LDN 公司和其他产品介绍：

 

德国LDN，全名labor diagnostika nord，是生物胺、神经递质检测的行业领先公司。 本试剂盒可用于人/大鼠/小鼠/各种动物样本，血清/抗凝血浆样本。

LABOR DIAGNOSTIKA NORD在德国始建于1996年， 目的是向临床和科研领域产品提供优质的检测产品和系统。最早的生物胺检测ELISA试剂，是LDN的ELISA系列核心，目前是全世界最大的生物胺检测试剂提供商；推荐特色产品是儿茶酚胺（catecholamines）检测系列，Histamine（组胺）检测ELISA，5-羟色胺（血清素）ELISA 试剂盒，自由Metanephrine（3-甲氧基肾上腺素）在血浆中的检测ELISA ；

 随后发展的内分泌检测系列和食物安全系列为德国LDN 另外两大产品系列。

LABOR DIAGNOSTIKA NORD  产品在全世界八十多个国家通过代理商或者OEM 合作伙伴进行销售，在北美洲通过子公司Rocky Mountain Diagnostics（ROCKY mountain诊断公司）进行销售。

 优势产品有：Histamine（组胺） ELISA ，Noradrenaline（去甲肾上腺素） ELISA,  Dopamine（多巴胺）ELISA, Serotonin ( 血清素，又名5羟色胺）ELISA等。根据不同的样本类型，分为Fast Track （快速），research 型，高敏型等多种类型；既有针对所有类型样本的research类型的，也有针对血清，血浆或者尿液的试剂盒；这些试剂盒都可用于所有animal的检测（如人，小鼠，大鼠，其他动物模型等）。

具体见下表：

 德国LDN生物胺，神经递质ELSIA 试剂盒:

指标主要有：儿茶酚胺（catecholamines）检测试剂盒：Adrenaline（肾上腺素），Dopamine （多巴胺），Noradrenaline（去甲肾上腺素）；

以及组合检测试剂盒：2-CAT（A-N）， 2-CAT（N-D），3-CAT；

Histamine（组胺），有针对尿液，血清，全血检测的试剂盒，也有针对细胞上清/尿液/全血检测的试剂盒；还有针对所有样本检测的试剂盒；检测粪便的组胺试剂盒；

 

Metanephrine（3-甲氧基肾上腺素），Normetanephrine（去甲-3-0-甲基肾上腺素），Serotonin（5-HT，色氨酸，5羟色胺），5-HIAA（5-吲哚乙酸），Glutamate（谷氨酸），GABA（氨基丁酸），Tryptophan（色氨酸）；

既有针对所有类型样本的research类型的，也有针对血清，血浆或者尿液的试剂盒；

这些试剂盒都可用于所有animal的检测（如人，小鼠，大鼠，牛，羊，猪，豚鼠，猴，兔等其他动物模型）。