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ELISA Reasgents
 产品介绍: BioTNT 推出升级版ELISA包被经济套餐升级版(5块板),方便客户进行ELISA 的包被实验。可用于进口未包被ELISA抗体对进行包被实验的配套使用, 品质 优良, 完全可以替代原装进口产品。也可用于实验室自己进行ELISA的构建研究。经测试,比原试剂盒提供的缓冲液配方可以显著提高试剂盒的灵敏度,降低试剂盒的检测下限,可以达到良好的稳定性;并显著降低试剂盒的本底;
 
包含多达11个组成,满足您ELISA包被所需!
 
您仅需订购原料试剂盒+包被经济套餐升级版,就可以完成整个ELISA包被+检测的实验!
 
产品包装如下:
 每个组分可以单独订购同样包装或者大包装;
 
 
产品编号 产品名称 EL-CPX-5
EL-CPX01   coating buffer 包被缓冲液   10ml(10X)
EL-CPX02  Nunc 单条可拆酶标板maxisorp   5板
EL-CPX03   酶标板稳定剂   100ml
EL-CPX04   生物素(Biotin)稀释液   60ml
EL-CPX05   HRP耦联物保护剂/稳定稀释液   60ml
EL-CPX06   显色液A,B(Substrate A,B)   30ml(各1瓶)
EL-CPX07   终止液(Stop Solution)   60ml
EL-CPX08   标准品稀释液和血清样品稀释液   120ml
EL-CPX09   洗涤液(20X)   120ml
EL-CPX10   酶标板铝箔袋1个;干燥剂2个;   5份
 
实验流程:

实验数据:
Human TRANCE/RANK L/TNFSF11 (Catalog Number: DY626)为例:
以RND duoset 为例,试剂盒示例数据 VS BioTNT包被经济套餐3+RND duoset

检测下限(pg/ml)(更低的检测下限代表试剂盒灵敏度更高,性能更好):

 
 
品牌 货号 品名 规格 特性 价格
BioTNT EL-CPX-5 ELISA包被经济套餐3(5块板) 可用于5块板的包被 ¥980
¥750
BioTNT EL-CPX11-100 封板膜(plate sealer) 共100张 ¥40
¥28
BioTNT EL-CPX11 封板膜(plate sealer) 共15张 ¥10
¥10
BioTNT EL-CPX10-7 100个干燥剂 100个 ¥40
¥30
BioTNT EL-CPX10-6 100个酶标铝箔袋 100个 ¥160
¥120
BioTNT EL-CPX10-5 酶标板自封铝箔袋+干燥剂3 25个铝箔自封袋+50包干燥剂 ¥60
¥50
BioTNT EL-CPX10 酶标板自封铝箔袋+干燥剂2 5个铝箔自封袋+10包干燥剂 ¥30
¥20
BioTNT EL-CPX09-500 ELISA 洗涤液(20x) 500ml ¥260
¥200
BioTNT EL-CPX09 ELISA 洗涤液(20x) 120ml ¥80
¥60
BioTNT EL-CPX08-500 样品稀释液I 500ml ¥490
¥380
BioTNT EL-CPX08 样品稀释液I 120ml ¥130
¥100
BioTNT EL-CPX07-250 终止液(Stop Solution) 250ml ¥260
¥200
BioTNT EL-CPX07 终止液(Stop Solution) 60ml ¥80
¥60
BioTNT EL-CPX06-200 显色液A,B(Substrate A,B) 100*2(各1瓶) ¥390
¥300
BioTNT EL-CPX06-1000 显色液A,B(Substrate A,B) 500*2(各1瓶) ¥1300
¥1000
BioTNT EL-CPX06 显色液A,B(Substrate A,B) 30*2(各1瓶) ¥130
¥100
BioTNT EL-CPX05-500 HRP耦联物保护剂/稳定稀释液 500ml ¥650
¥500
BioTNT EL-CPX05-250 HRP耦联物保护剂/稳定稀释液 250ml ¥390
¥300
BioTNT EL-CPX05 HRP耦联物保护剂/稳定稀释液 60ml ¥130
¥100
BioTNT EL-CPX04-250 生物素(Biotin)稀释液 250ml ¥390
¥300
BioTNT EL-CPX04 生物素(Biotin)稀释液 60ml ¥130
¥100
BioTNT EL-CPX03-500 酶标板稳定剂 500ml(即用型) ¥780
¥600
BioTNT EL-CPX03 酶标板稳定剂 100ml(即用型) ¥260
¥200
BioTNT EL-CPX02-60 Nunc 单条可拆酶标板 maxisorp 60个/箱 ¥1560
¥1200
BioTNT EL-CPX02 Nunc 单条可拆酶标板 maxisorp 5个/包 ¥160
¥120
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 试剂盒使用说明:
 注意事项及说明:
 Ø 上述试剂均可2-8℃保存,保质期为一年;其中终止液可以室温或低温保存;
 Ø 试剂如储存时间较久,请在正式实验前进行预实验验证试剂质量;
 Ø 显色液B液需避光保存;
 Ø 酶标板稳定剂经0.2um过虑,含非汞防腐剂以抑制保存过程中微生物繁殖;
 Ø 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴防护手套操作。
 

试剂使用说明和包被实验示例:
一、包被液的配制: coating buffer 包被缓冲液(EL-CPX01):该试剂为10X 浓缩液,使用前请根据实验用量,用蒸馏水稀释至1X,即配即用,例:10ml coating buffer + 90ml 蒸馏水;
 Coating buffer 用于抗体的包被;可替代以PBS为主的包被液体;请用1* Coating buffer 和适量抗体配成包被液,抗体浓度请参考抗体的说明。

二、包被实验示例: 在ELISA 酶标板(EL-CPX02)中每孔加入100ul包被液(包被液若有剩余可多包 被一点,以条为单位),在板上贴膜或者盖上盖子(防止异物进入板孔),室温(控制室温在25℃,板放置处旁放置温度计控温)温育过夜(下午4点到第二天早上9点,不宜缩短时间,会降低包板效率);结束温育(也请参考抗体说明 书的包被条件进行相应调整)。多余的配好的包被液不能保存。

三、洗板封闭:
  1. 将洗液20×Wash Buffer(EL-CPX09)配制成1×Wash Buffer(实验前请合 理计算用量,配制成足够的量待用),用1×Wash Buffer洗板4次(注:包被 组分在加稳定剂前不能剧烈震荡或完全干燥,所以洗板过程需快速、温和,不要拼命拍板);
  2. 洗板后立即加入200ul每孔的酶标板稳定剂(EL-CPX03),在板上贴膜 (EL-CPX11),37℃温育 1小时;
  3. 弃掉或吸取酶标板稳定剂(注:拍干,千万不要洗板)。
 封闭好的酶标板可以有以下几种处理方式。
 方式一:直接进行检测。
 方式二:
  1. 冻干成品:把酶标板放入冰箱,-20℃冰箱冷冻过夜。
  2. 调试真空冻干机,立即将冷冻过夜的酶标板放入真空冻干机冻干24小时;
  3. 取出冻干的酶标板,立即将酶标板放入一个装有干燥剂的铝箔袋内 (EL-CPX10),贴上标签,放4℃冰箱长期保存。(冻干同时可进行标准品冻干)。
 方式三:室温晾干
 按照以下方法晾干长期保存:
  1. 室温或者 37°C ;
  2. 湿度: 最好在一个湿盒中(小于 15% 湿度);
  3.  时间: 2-24 小时,晾干;确认干燥
  4. 立即将将经过稳定剂处理的产品封装在一个含有干燥剂(EL-CPX10)的密 闭防潮容器中,正确使用干燥剂包装是长期保存的关键。
 注意:如果酶标板不直接进行检测,必须采用方式二或者方式三,进行干燥。干 燥后的酶标板才可以稳定保存。
 
四、检测方法示例
 (请参考抗体说明,安排相应的检测方法,根据您的实验路线,如果是双抗夹心 法,可以选择酶标二抗,也可以选择生物素二抗,采用生物素-亲和素的放大系 统):
 实验示例:下面是双抗夹心法的实验示例:
  1. 以上的酶标板已经预包被了抗体,选取相应的板条;
  2. 标准品请用相应的稀释液稀释;如检测的是血清,标准品用EL-CPX08稀释; 如果检测的是细胞上清样品或其他非血清样品,请用EL-CPV03(需另购)稀释标 准品;样本可以选择几个样本,做原倍不稀释,两倍稀释,10倍稀释等梯度;
  3. 酶标板中加入适量稀释好的标准品和样品,各100ul;
  4. 37 度温育1到2小时;
  5.  洗板四次(洗液同上);
  6. 生物素二抗请根据说明书,用生物素(Biotin)稀释液(EL-CPV04)进行 稀释;
  7.  37度温育30分钟;
  8. 洗板四次;
  9. 酶标二抗,请用(EL-CPV05)稀释;
  10.  每孔加入100ul 稀释好的酶标二抗,37度温育1小时或其他时间;
  11. 洗板四次;
  12.  加入显色液:显色液A,B(Substrate A,B)(EL-CPI03);使用前请按 按照A液和B液1:1比例充分混匀,方可使用,使用前15分钟配置;每孔加入 50ul-100ul 混合后的显色液;室温温育10-30分钟:显色时间根据目测最高浓 度标准品的颜色,应为深蓝色,630读数,OD 值应在0.7以上;
  13.  加入终止液(Stop Solution)(EL-CPI04)100ul 每孔。
 加入终止液50ul-100ul,显色从蓝色转为黄色。建议采用450-630的双波读数。
 注:根据实验设计不同的包被浓度,酶标二抗浓度,HRP浓度,反应时间等变量, 找到最优化的实验条件。确定试剂盒定量范围、灵敏度等试剂盒特性。
 双抗夹心法可以回归为线性、二次曲线,或者四参数曲线;
 竞争法可以回归为log-logit,或者四参数曲线;

 

注意事项及说明:

Ø  上述试剂均可2-8℃保存,保质期为一年;其中终止液可以室温或低温保存;

Ø  试剂如储存时间较久,请在正式实验前进行预实验验证试剂质量;

Ø  显色液B液需避光保存;

Ø  酶标板稳定剂经0.2um过虑,含非汞防腐剂以抑制保存过程中微生物繁殖;

Ø  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴防护手套操作。


试剂使用说明和包被实验示例:

一、包被液的配制:

coating buffer 包被缓冲液(EL-CPI01):该试剂为10X 浓缩液,使用前请根据实验用量,用蒸馏水稀释至1X,即配即用,例:10ml coating buffer + 90ml蒸馏水;

 Coating buffer 用于抗体的包被;可替代以PBS为主的包被液体;请用1* coating  buffer和适量抗体配成包被液,抗体浓度请参考抗体的说明。


二、包被实验示例:

ELISA酶标板(EL-CPI02中每孔加入100ul包被液(包被液若有剩余可多包被一点,以条为单位),在板上贴膜,室温(控制室温在25,板放置处旁放置温度计控温)温育过夜(下午4点到第二天早上9点,不宜缩短时间,会降低包板效率);结束温育(也请参考抗体说明书的包被条件进行相应调整)。多余的配好的包被液不能保存。


三、洗板封闭:

1)        洗液20×Wash BufferEL-00402(可以用PBS +Tween 20代替)配制成1×Wash Buffer(实验前请合理计算用量,配制成足够的量待用),用1×Wash Buffer洗板4次(注:包被组分在加稳定剂前不能剧烈震荡或完全干燥,所以洗板过程需快速、温和,不要拼命拍板);

2)        洗板后立即加入200ul每孔的酶标板稳定剂(EL-CPI02),37温育1小时;

3)        弃掉或吸取酶标板稳定剂(注:拍干,千万不要洗板)。


封闭好的酶标板可以有以下几种处理方式。

方式一:直接进行检测。


方式二:

1)   冻干成品:把酶标板放入冰箱,-20℃冰箱冷冻过夜。

2)   调试真空冻干机,立即将冷冻过夜的酶标板放入真空冻干机冻干24小时;

3)   取出冻干的酶标板,立即将酶标板放入一个装有干燥剂(EL-CPI06)的铝箔袋内(EL-CPI05),贴上标签,放4℃冰箱长期保存。(冻干同时可进行标准品冻干)。


方式三:室温晾干

按照以下方法晾干长期保存:

1)   室温或者 37°C ;

2)   湿度: 最好在一个湿盒中(小于 15% 湿度);

3)    时间: 2-24 小时,晾干;确认干燥

4)   立即将将经过稳定剂处理的产品封装在一个含有干燥剂(EL-CPI06)的密闭防潮容器中,正确使用干燥剂包装是长期保存的关键。

注意:如果酶标板不直接进行检测,必须采用方式二或者方式三,进行干燥。干燥后的酶标板才可以稳定保存。


四、检测方法示例

(请参考抗体说明,安排相应的检测方法,根据您的实验路线,如果是双抗夹心法,可以选择酶标二抗,也可以选择生物素二抗,采用生物素-亲和素的放大系统):

实验示例:下面是双抗夹心法的实验示例: 

1)        以上的酶标板已经预包被了抗体,选取相应的板条;

2)        标准品请用相应的稀释液稀释;如检测的是血清,标准品用EL-CPV02稀释;如果检测的是细胞上清样品或其他非血清样品,请用EL-CPV03稀释;

3)        酶标板中加入适量稀释好的标准品和样品,各100ul

4)        37度温育12小时;

5)        洗板四次(洗液同上);

6)        生物素二抗请根据说明书,用生物素(Biotin)稀释液(EL-CPV04)进行稀释;

7)        37度温育30分钟;

8)        洗板四次;

9)        酶标二抗,请用(EL-CPV05)稀释;

10)     每孔加入100ul 稀释好的酶标二抗,37度温育1小时或其他时间;

11)     洗板四次;

12)     加入显色液:显色液ABSubstrate AB)(EL-CPI03);使用前请按按照A液和B11比例充分混匀,方可使用,使用前15分钟配置;每孔加入50ul-100ul混合后的显色液;室温温育10-30分钟:显色时间根据目测最高浓度标准品的颜色,应为深蓝色,630读数,OD 值应在0.7以上;

13)     加入终止液(Stop Solution)(EL-CPI04100ul 每孔。

加入终止液50ul-100ul,显色从蓝色转为黄色。建议采用450-630的双波读数。

 

注:根据实验设计不同的包被浓度,酶标二抗浓度,HRP浓度,反应时间等变量,找到最优化的实验条件。确定试剂盒定量范围、灵敏度等试剂盒特性。

双抗夹心法可以回归为线性、二次曲线,或者四参数曲线;

竞争法可以回归为log-logit,或者四参数曲线;


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