产品介绍：
BioTNT 推出升级版ELISA包被经济套餐3（5块板），方便客户进行ELISA 的包被实验。可用于进口未包被ELISA 抗体对进行包被实验的配套使用, 品质优良, 完全可以替代原装进口产品。也可用于实验室自己进行ELISA的构建研究。经测试，比原试剂盒提供的缓冲液配方可以显著提高试剂盒的灵敏度，降低试剂盒的检测下限，可以达到良好的稳定性；并显著降低试剂盒的本底；
实验流程：
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实验数据：
Human TRANCE/RANK L/TNFSF11 （Catalog Number: DY626）为例：
以RND duoset 为例，试剂盒示例数据 VS BioTNT包被经济套餐3+RND duoset
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检测下限（pg/ml）（更低的检测下限代表试剂盒灵敏度更高，性能更好）：
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价格对比（5块板）：
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订购信息：
EL-CPX-5，ELISA包被经济套餐3（5块板）， 可用于5块板ELISA 包被；可适用于RND duoset 5块板的配套包被使用；适用于anogen 5块板的配套包被使用；适用于adipogen 5块板的配套包被使用；
EL-CPX-10，ELISA包被经济套餐3（10块板），可用于10块板ELISA 包被，可适用于anogen 10块板的配套包被使用；可适用于antigenix 10块板的配套包被使用；
EL-CPX-15， ELISA包被经济套餐3（15块板），可以用于15块板ELISA 包被，可适用于RND duoset 15块板的配套包被使用；
产品包装如下：
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产品编号
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产品名称
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EL-CPX-5
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EL-CPX-10
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EL-CPX-15
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EL-CPX01
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coating buffer 包被缓冲液
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15ml（10X）
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30ml（10X）
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50 ml (10X）
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EL-CPX02
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Nunc 单条可拆酶标板maxisorp
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5个/包
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10个/包
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15个/包
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EL-CPX03
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酶标板稳定剂
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100ml（即用型）
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200ml（即用型）
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300ml（即用型）
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EL-CPX08
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标准品稀释液和血清样品稀释液
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50ml
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50ml
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50ml
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EL-CPX04
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生物素（Biotin）稀释液
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25ml
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50ml
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75ml
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EL-CPX05
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HRP耦联物保护剂/稳定稀释液
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50ml
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100ml
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150ml
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EL-CPX06
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显色液A，B（Substrate A，B）
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30ml（各1瓶）
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60ml（各1瓶）
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100（各1瓶）
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EL-CPX07
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终止液（Stop Solution）
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50ml（即用型）
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100ml（即用型）
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150ml（即用型）
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使用举例：
Human TRANCE/RANK L/TNFSF11 （Catalog Number: DY626）为例：
如果客户购买RND systems的duoset 未包被ELISA kit，试剂盒提供：CaptureAntibody (1 vial) ，Detection Antibody (1 vial) ，Standard，Streptavidin-HRP (1 vial)；
BioTNT 提供的ELISA包被经济套装3 EL-CPX提供了包被需要的绝大多数试剂；经测试，比原试剂盒提供的缓冲液配方可以显著提高试剂盒的灵敏度，结合冻干工艺，可以达到良好的稳定性；并显著降低试剂盒的本底；
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成分货号
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内容
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BioTNT 包被产品特点
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R公司产品
DY008产品成分
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EL-CPX01
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coating buffer 包被缓冲液
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经典配方，适用于双抗夹心法的一抗包被；
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137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 8.1 mM Na2HPO4, 1.5 mM KH2PO4, pH 7.2-7.4, 0.2 μm filtered (R&D Systems®, Catalog # DY006).
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EL-CPX02
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Nunc 单条可拆酶标板maxisorp
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提供高灵敏nunc 酶标板（maxisorp），单孔可拆，灵敏度高；
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DY990，96孔板
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EL-CPX03
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酶标板稳定剂
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可与国外原装酶标板稳定剂相媲美，上百次实验验证；可以集blocking和酶标板稳定于一步。
Biotnt 提供的酶标板稳定剂可以给您两方面的帮助：
1. 封闭非特异性和未结合的位点,减少实验背景；
2.稳定被固定的生物分子,改善测试试剂盒的货架寿命；
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Reagent Diluent: 1% BSA in PBS, pH 7.2-7.4, 0.2 μm filtered (R&D Systems®, Catalog # DY995)
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EL-CPX08
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标准品稀释液和血清样品稀释液
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biotnt提供的样品稀释液同时可用于标准品的稀释，可以降低零孔的本底； 用PBS 来代替时，本底会升高；
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采用Reagent Diluent，配方同上。与血清并不类似
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EL-CPX04
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生物素（Biotin）稀释液
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可稳定保存biotin 抗体，用PBS 来代替时，biotin 溶液不够稳定；
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采用Reagent Diluent，配方同上。没有稳定作用
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EL-CPX05
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HRP耦联物保护剂/稳定稀释液
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1. HRP耦联物保护剂/稳定稀释液产品特点：
提高信燥比：可提高免疫实验的敏感度，降低背景；
提高了实验的可重复性；
Biotnt提供的HRP耦联物保护剂，可把几万倍的HRP浓缩液用HRP耦联物保护剂/稳定稀释液稀释至100×或者20×，并在4度稳定保存半年，可稀释HRP浓缩液为即用型，方便日常实验的使用。
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2. 采用Reagent Diluent，配方同上。 PBS 或者reagent diluent来代替时，稳定性不好，本底升高，实验的灵敏度降低；
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EL-CPX06
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显色液A，B（Substrate A，B）
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优点：
1．稳定性好：室温储存12个月；2-8度至少24个月；
2．安全性好：不含有害溶剂，如DMF或者DMSO；
3．双组分， 灵敏度极高；
4．批间差小，背景低，效率高；
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TMB A, B 液(R&D Systems®, Catalog # DY999)
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EL-CPX07
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终止液（Stop Solution）
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经典终止液配方2 N H2SO4
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2 N H2SO4 (R&D Systems®, Catalog # DY994)
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可以BIOTNT ELISA 辅助试剂中找到其他ELISA 需要使用到的产品：
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品名
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货号
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品牌
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规格
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用途
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封板膜（plate sealer）
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EL-CPI05-01
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BioTNT
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1大张
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可以剪裁后用于板的密封
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酶标板自封铝箔袋+干燥剂
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EL-CPI05-20
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BioTNT
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20个自封袋+40个干燥剂
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包被板的密封，干燥，稳定
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样品稀释液：非血清样品
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EL-CPV03-100
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BioTNT
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100ml
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用来稀释细胞上清样品或其他非血清样品
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ELISA 洗涤液（20X）
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EL-00402-250
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BioTNT
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250ml
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包被过程和实验过程中用于洗板；如果对实验要求不高，可以用PBS（EL-00402）代替；
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PBS (缓冲液干粉
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P1010-2L
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BioTNT
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2L
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可用来配制2L PBS 的干粉
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更多产品见ELISA reagents 产品目录；http://www.biotnt.com/product/ELISA-Reagents.aspx
Biotnt 提供以下标本代测服务和ELISA包被服务：
1、 预包被试剂盒的查找和代测服务：Biotnt 提供以下品牌如美国Antigenix，ADI，Biolegend，Crystal，ebioscience， monobind，pheonixpeptide，Raybiotech，Rndsystems， Zeus scentific， 德国LDN， DRG, domestic， IBL, 日本shibayaji，瑞典Mercordia， 加拿大Anogen，等国际著名ELISA品牌的试剂盒代购和实验代测服务；更多可靠品牌可以查询，并咨询相应地区销售负责人；
2、 BioTNT 推出RND duoset试剂盒的包被和检测服务：
您在RND Systems 官网查询到的duoset 试剂盒，由biotnt 代购 或者由客户自己提供，biotnt 进行包被和代测服务，仅收取1000元/板的技术服务费，每板可以进行80个样品的单孔检测；
举例：
购买：
Human Angiopoietin-2 DuoSet, 15 Plate； 货号：DY623 ；
可进行15块板的包被和检测； 费用仅需：8440+15000=23440；
合计：每块板的费用为：1563元；
优点：可以用RND 品牌发表文章，发表文章时materials：Human Angiopoietin-2 DuoSet， Biotnt construct pack I and Biotnt construct pack II；
BioTNT 技术中心多年ELISA 实验经验，保证您获得可靠的实验数据；
3、BioTNT 推出ebioscience ELISA Ready-SET-Go!®的包被和检测服务；
您在ebioscience官网查询到的ELISA Ready-SET-Go!®试剂盒，由biotnt 代购 或者由客户自己提供，biotnt 进行包被和代测服务，单块板收取1500元/板的技术服务费，包括试剂盒的购买费用；每板可以进行80个样品的单孔检测；
举例：
购买：
Human IL-10 ELISA Ready-SET-Go!®； 货号：88-7106 ；
每块板的费用仅需要1500元；
优点：可以用ebiosceince 品牌发表文章，发表文章时materials：Human IL-10 ELISA Ready-SET-Go!®； 货号：88-7106 ；Biotnt construct pack I and Biotnt construct pack II；
BioTNT 技术中心多年ELISA 实验经验，保证您获得可靠的实验数据；
4、BioTNT 推出antigenix ELISA construction kit的包被和检测服务；
您在antigenix官网查询到的ELISA construction kit 试剂盒，由biotnt 代购 或者由客户自己提供，biotnt 进行包被和代测服务，仅收取1000元/板的技术服务费，每板可以进行80个样品的单孔检测；
举例：
购买：
Mouse IL 1 Beta Construction Kit； 货号：RMF120CK ；
可进行10块板的包被和检测； 费用仅需：6500+10000=16500；
合计：每块板的费用为：1650元；
优点：可以用antigenix 品牌发表文章，发表文章时materials：Mouse IL 1 Beta Construction Kit； 货号：RMF120CK ；Biotnt construct pack I and Biotnt construct pack II；
BioTNT 技术中心多年ELISA 实验经验，保证您获得可靠的实验数据；
5、BioTNT 推出Biolegend ELISA 未包被板的包被和检测服务；
您在biolegend 官网查询到的ELISA construction kit 试剂盒，由biotnt 代购 或者由客户自己提供，biotnt 进行包被和代测服务，仅收取1000元/板的技术服务费，每板可以进行80个样品的单孔检测；
举例：
购买：human IFN gamma ELISA 的5块板，未包被包装；
可进行5 块板的包被和检测； 费用仅需：4000+5000=9000；
合计：每块板的费用为：1800元；
优点：可以用Biolegend 品牌发表文章，发表文章时materials：human IFN gamma ELISA ；Biotnt construct pack I and Biotnt construct pack II；
BioTNT 技术中心多年ELISA 实验经验，保证您获得可靠的实验数据；
以上所有检测服务，如果不需要，仅需要提供包被服务，价格相同；包被板可以稳定6个月（包被质量依赖于capture 抗体的质量）
6、 Biotnt 同时提供可与原装进口媲美的ELISA Construction Pack， 方便客户进行ELISA 实验；
7、Biotnt 提供更多的ELISA developing 试剂，方便您进行ELISA的科研和生产；
8、Biotnt 提供抗体选择咨询：依据多年的ELISA实验经验和严禁的实验态度，Biotnt 愿与您探讨ELISA抗体的选择和购买；
9、 对于客户提供的一抗和二抗，标准品进行试剂盒研发，收取3000元/每个项目的研发费用；
10、 ELISA 辅助服务：如果客户提供的是固体样本，如组织或细胞，需要Biotnt 进行组织匀浆或细胞裂解，提蛋白，以及蛋白定量；这一步需要收取费用；
ELISA 样本：
建议客户提供液体标本进行ELISA检测，如血清，抗凝血浆，细胞上清，其他生物学体液；如客户的样本为组织或者细胞等非液体样本，需要进行样本的预处理；客户可以自己对样本进行预处理，如组织的匀浆，然后测定蛋白含量；细胞样本进行细胞裂解液制备后，也需要进行蛋白定量；蛋白定量请采用Bradford 法或者BCA法进行。
注意事项及说明：
Ø 上述试剂均可2-8℃保存，保质期为一年；其中终止液可以室温或低温保存；
Ø 试剂如储存时间较久，请在正式实验前进行预实验验证试剂质量；
Ø
显色液B液需避光保存；
Ø
酶标板稳定剂经0.2um过虑，含非汞防腐剂以抑制保存过程中微生物繁殖；
Ø 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护手套操作。
试剂使用说明和包被实验示例：
一、包被液的配制：
coating buffer 包被缓冲液（EL-CPI01）：该试剂为10X
浓缩液，使用前请根据实验用量，用蒸馏水稀释至1X，即配即用，例：10ml
coating buffer + 90ml蒸馏水；
Coating buffer 用于抗体的包被；可替代以PBS为主的包被液体；请用1*
coating buffer和适量抗体配成包被液，抗体浓度请参考抗体的说明。
二、包被实验示例：
在ELISA酶标板（EL-CPI02）中每孔加入100ul包被液（包被液若有剩余可多包被一点，以条为单位），在板上贴膜，室温（控制室温在25℃，板放置处旁放置温度计控温）温育过夜（下午4点到第二天早上9点，不宜缩短时间，会降低包板效率）；结束温育（也请参考抗体说明书的包被条件进行相应调整）。多余的配好的包被液不能保存。
三、洗板封闭：
1)
将洗液20×Wash Buffer（EL-00402）（可以用PBS
+Tween 20代替）配制成1×Wash Buffer（实验前请合理计算用量，配制成足够的量待用），用1×Wash
Buffer洗板4次（注：包被组分在加稳定剂前不能剧烈震荡或完全干燥，所以洗板过程需快速、温和，不要拼命拍板）；
2)
洗板后立即加入200ul每孔的酶标板稳定剂（EL-CPI02），37℃温育1小时；
3)
弃掉或吸取酶标板稳定剂（注：拍干，千万不要洗板）。
封闭好的酶标板可以有以下几种处理方式。
方式一：直接进行检测。
方式二：
1)
冻干成品：把酶标板放入冰箱，-20℃冰箱冷冻过夜。
2)
调试真空冻干机，立即将冷冻过夜的酶标板放入真空冻干机冻干24小时；
3)
取出冻干的酶标板，立即将酶标板放入一个装有干燥剂（EL-CPI06）的铝箔袋内（EL-CPI05），贴上标签，放4℃冰箱长期保存。（冻干同时可进行标准品冻干）。
方式三：室温晾干
按照以下方法晾干长期保存：
1)
室温或者 37°C ；
2)
湿度: 最好在一个湿盒中(小于 15% 湿度)；
3)
时间: 2-24 小时，晾干；确认干燥
4)
立即将将经过稳定剂处理的产品封装在一个含有干燥剂（EL-CPI06）的密闭防潮容器中，正确使用干燥剂包装是长期保存的关键。
注意：如果酶标板不直接进行检测，必须采用方式二或者方式三，进行干燥。干燥后的酶标板才可以稳定保存。
四、检测方法示例
（请参考抗体说明，安排相应的检测方法，根据您的实验路线，如果是双抗夹心法，可以选择酶标二抗，也可以选择生物素二抗，采用生物素-亲和素的放大系统）：
实验示例：下面是双抗夹心法的实验示例：
1)
以上的酶标板已经预包被了抗体，选取相应的板条；
2)
标准品请用相应的稀释液稀释；如检测的是血清，标准品用EL-CPV02稀释；如果检测的是细胞上清样品或其他非血清样品，请用EL-CPV03稀释；
3)
酶标板中加入适量稀释好的标准品和样品，各100ul；
4)
37度温育1到2小时；
5)
洗板四次（洗液同上）；
6)
生物素二抗请根据说明书，用生物素（Biotin）稀释液（EL-CPV04）进行稀释；
7)
37度温育30分钟；
8)
洗板四次；
9)
酶标二抗，请用（EL-CPV05）稀释；
10)
每孔加入100ul
稀释好的酶标二抗，37度温育1小时或其他时间；
11)
洗板四次；
12)
加入显色液：显色液A，B（Substrate A，B）（EL-CPI03）；使用前请按按照A液和B液1：1比例充分混匀，方可使用，使用前15分钟配置；每孔加入50ul-100ul混合后的显色液；室温温育10-30分钟：显色时间根据目测最高浓度标准品的颜色，应为深蓝色，630读数，OD 值应在0.7以上；
13)
加入终止液（Stop Solution）（EL-CPI04）100ul 每孔。
加入终止液50ul-100ul，显色从蓝色转为黄色。建议采用450-630的双波读数。
注：根据实验设计不同的包被浓度，酶标二抗浓度，HRP浓度，反应时间等变量，找到最优化的实验条件。确定试剂盒定量范围、灵敏度等试剂盒特性。
双抗夹心法可以回归为线性、二次曲线，或者四参数曲线；
竞争法可以回归为log-logit，或者四参数曲线；
ELISACAL