大鼠干扰素-γ酶联免疫试剂盒

Rat IFN-γ ELISA Kit

用于血清，血浆，细胞上清及其他生物体液中

大鼠干扰素-γ的检测

货号：A1010A0316

96 tests

仅供科研使用，勿用于药物、临床检测

联系地址：上海市闵行区罗锦路 98 号 2 幢 5 楼，邮编：200237

联系电话：86 21 51692391，4008801880

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检测原理：

本试剂盒采用双抗夹心法。用抗 Rat IFN-γ 抗体包被于酶标板上，标准品和样本中的 Rat

IFN-γ 与单抗结合，加入生物素化的抗 Rat IFN-γ，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的 streptavidin 与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液，在 450nm

处测 OD 值，Rat IFN-γ 浓度与 OD 值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中 Rat IFN-γ 的浓度。

试剂盒组份（2-8℃保存）

1. 酶标板（coated wells） 96 test；

2. 稀释液 I（Standard Diluent I） 10 ml；

3. 800ng 标准品（standards） 2 vial；

4. 生物素化二抗（Biotinylated Antibody） 11 ml；

5. 亲和链霉素-辣根过氧化物酶结合物（Streptavidin- HRP Conjugate） 11ml；

6. 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer） 50 ml；

7. 显色液 A（Color Reagent A） 6 ml；

8. 显色液 B（Color Reagent B） 6 ml；

9. 终止液（Stop Solution） 12 ml；

未提供的试剂、仪器和耗材： 

1. 单道或多道（8 道或 12 道）移液器及移液器枪头：10-200ul 和 50-1000ul；

2. 多道（8 道或 12 道）移液器试剂存放槽；

3. EP 管及试剂配置容器；

4. 圆柱形量筒：100mL，200mL，500mL 和 1L；

5. 可在 450nm 处进行读数的酶标仪；

6. 洗瓶或自动洗板机；

7. 蒸馏水或去离子水；

8. 封板膜或板盖；

9. 乳胶手套；

10. 吸水纸；

注意事项： 

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室

温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中

不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发出来的强烈气体。任何漂白成分都会

破坏试剂盒中反映试剂的生物活性。

8. 标准孔及待测样本均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线，请合理安排预实验。

9. 不能使用过期产品。

样本与试剂准备： 

1. 收集标本：血清，血浆（EDTA，肝素抗凝），细胞培养上清液，组织匀浆等尽早检测，

2-8℃保存 48 小时，更长时间需冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。

2. 标准品配制：使用前加入 1ml 稀释液 I 复溶标准品，充分混匀，配成 800ng/ml 的溶液

（此溶液可进行分装，-20℃，有效期约 1 个月）；准备一支空 EP 管，取 5ul 的 800ng/ml

标准品复溶液至空 EP 管中，加入 995ul 稀释液 I，配成浓度为 4000pg/ml 的标准品溶

液（标准曲线最高点）；再准备六支空 EP 管，分别加入 500ul 稀释液 I，吸取 4000pg/ml

的标准品溶液 500ul 加入第一管中，充分混匀，从第一管中取 500ul 加到第二管中，充

分混匀，如此反复对半稀释至浓度 62.5pg/ml 的标准品溶液；另取一空白 EP 管加入足

量的稀释液 I，设为空白对照。

3. Biotinylated Antibody：即用型。平衡到室温后直接使用。

4. Streptavidin-HRP Conjugate：即用型。平衡到室温后直接使用。

5. 显色液配制：A 液和 B 液做 1：1 配制，即配即用，可根据使用量临时配制（不稳定），

不要配制过多的显色液。

6. 1×洗涤液配制：用蒸馏水 1：20 倍稀释（示例：1ml 20×浓缩洗涤液加入 19ml 蒸馏水）；

操作步骤：

1. 加样：加入相对应标准品，待测样品各 100ul，封板，充分混匀置 37℃ 温育 60 分钟；

2. 洗板：用 1×洗涤液将反应板充分洗涤 4 次，在吸水纸上拍干；

3. 每孔加入已稀释 1×Biotinylated Antibody 100ul，封板，置于 37℃ 温育 45 分钟；

4. 洗板：同第二步；

5. 每孔加 1×Streptavidin- HRP 100ul，封板，置于 37℃进行温育 15 分钟；

6. 洗板：同第二步；

7. 每孔加入已配制的显色工作液 100ul，将反应板置暗处室温 5-30 分钟（可以目测实际

显色情况，如显色过深，请及时终止）；

8. 每孔加入 100ul 终止液，混匀；

9. 设置酶标仪主波长 450nm 副波长 630nm 检测吸光度，终止后 30 分钟内读数。

结果计算与判断： 

1. 所有 OD 值都应减除空白值后在计算；

2. 以标准品 4000，2000，1000，500，250，125，62.5，0pg/ml 为横坐标，OD 值为纵坐

标，画出标准曲线。

3. 根据样本 OD 值在该曲线图上查出相对应 Rat IFN-γ 含量，如样本有稀释，请再乘上稀

释倍数。

试剂盒数据重复性： 

选取血清、血浆、细胞上清等不同类型不同浓度的大鼠样本各 8 例做双复孔验证试验，

将检测的 OD 值复孔间 C.V.值统计结果如下：

试剂盒数据回归性：

选取血清、血浆、细胞上清等不同类型的大鼠样本按低浓度、中浓度、高浓度分组稀释

做回归性验证试验，将线性回归后的浓度值与理论浓度值相比较统计结果如下：

试剂盒灵敏度：

本试剂盒检测 rat IFN-γ 的最低浓度为 7.8pg/ml，验证试验选取两条标准品进行梯度稀释

确认 7.8pg/ml 以上浓度的反应孔 OD 值呈正相关线性分布，IFN-γ 浓度在 7.8-62.5pg/ml 之间

样本可以被检测到但会有较大偏差，低于 7.8pg/ml 无法被检出。