Realtime PCR PreMIX（高ROX）

（适用高ROX仪器）

本产品货号为 A2010A012和A2010A012X5

产品介绍

本产品由qPCR Premix和独立的ROX 染料，DEPC 水，三个组分组成。

qPCR Premix含有优化浓度的Fast HSTaq DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液和稳定剂等成分。Fast HSTaq DNA Polymerase高温加热前，抗Taq单克隆抗体与Taq结合，抑制Taq的聚合酶活性，从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板DNA非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。抗体在PCR反应的预变性步骤中已完全失活，不会阻碍之后Taq酶聚合反应，大大提高了PCR反应的灵敏度及特异性。优化浓度的SYBR Green I荧光染料掺入DNA双链后，荧光信号增强，而不掺入链中SYBR Green I染料分子荧光信号不变，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步，荧光可以在退火或延伸阶段测定。

按照如下体系配置ROX 染料，可以适用于需要High ROX校正的仪器：ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

使用说明

1)    从冰箱中取出本产品，室温融化后轻轻震荡混匀，1000rpm简短离心10–15秒。

2)    qPCR反应体系配制：请参考以下方式配制体系：

20μLPCR反应体系下推荐，2–500ng基因组DNA，10pg–50ng质粒或环状DNA，2–20ng cDNA

3)    按照以上方式使用本产品进行qPCR实验可应用在市场现存的以下各种qPCR仪器:

需要High ROX校正的仪器：ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

*当引物Tm值≥60℃，扩增产物<300bp时，推荐两步法反应条件；

**当引物Tm值<60℃，扩增产物>300bp时，推荐三步法反应条件；

***本mix采用的是hot start 抗体taq酶，该酶保证了Real-Time PCR实验的特异性，并降低了实验操作难度（反应液配制时不需要在冰上操作，加样时间即使比较久，非特异性反应很少），必须有95℃5分钟这一步，否则会导致后面的反应不能进行，没有信号检测出；

自备设备和试剂

1)    模板：cDNA，基因组DNA，质粒DNA，噬菌体DNA；

2)    上下游引物，推荐BioTNT®Preci®mRNA qPCR Primer Pair；

3)    BioTNT® Preci® qPCR Positive Control

4)    RNase-free Water；

5)    96孔或384孔PCR板；0.2mL或0.5mL Eppendorf管（无菌、无酶、RNase-free）；

6)    移液器（10μL、200μL规格）及RNase-free Tips（10μL、200μL的枪头）；

7)    Real-Time PCR仪；13000rpm离心机；

PCR结果判断

1、  扩增曲线为s型，如下左图所示：

2、  熔解曲线为单峰，且峰的Tm值与产物理论Tm相差在±2℃以内，如下右图所示：

注：引物设计软件报告会通过计算CG含量以及序列位置得到理论Tm值，实验所得熔解曲线峰所对应的Tm值会因为仪器的不同而变化，但变化不会超过±2℃，如果相差过大，可能并不是目的基因的产物。

运输与储存

1)    冰袋或干冰运输，收到后立即贮存于–20℃。

2)    -20℃储存,有效期为6月。

3)    可多次冻融。不多于6次冻融。

质量标准（QC）

经BioTNT BALB/c小鼠核酸通用PCR阳性模板验证合格的基因引物，其适用于几乎所有BALB/c小鼠样本的PCR扩增，并且其熔解曲线呈特异性单峰，可以相当准确地显示目的基因的表达水平。如果客户的引物经本产品验证不合格，推荐您购买BioTNT引物，为您节省很多宝贵的精力和时间。

技术支持

1)    BioTNT为其所提供的技术支持质量和效率而自豪。技术支持部门在样品及检测领域及对BioTNT产品具有丰富的实践经验和充足的理论知识。如果您PCR或其它产品有问题或遇到困难，请联系我们，无需迟疑。

2)    BioTNT客户是我们产品改进和特殊应用信息的主要来源。您所提供的信息对于BioTNT的研究人员很有帮助。当您对产品性能或新的应用及新的技术有任何建议时，我们希望您能及时联系我们。

3)    有关技术支持和更多信息，请浏览www.biotnt.com或致电BioTNT技术支持部门。

BioTNT配套试剂

更多产品规格请登录www.biotnt.com查询

注意事项

1)    为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护手套操作。

2)           如需更详细信息，请向产品供应商咨询相关的材料安全数据书。

使用限制

本产品只用于分子生物学研究。不能应用于诊断、预防和治疗疾病。

产品可以登陆冠泰生物商城订购：请扫描以下图标。

产品由上海冠泰生物科技有限公司提供。