一代测序技术主要是指Sanger测序法，也称双脱氧链末端终止法。以下是关于一代测序的详细介绍：

原理

Sanger测序法基于DNA聚合酶合成反应。其核心是利用双脱氧三磷酸核苷（ddNTP）作为链终止剂。在反应体系中，当DNA聚合酶在模板上合成新的DNA链时，加入带有荧光标记的ddNTP。由于ddNTP缺少3'-OH基团，无法形成磷酸二酯键，导致DNA链延伸中断。通过凝胶电泳分离不同长度的DNA片段，并根据荧光信号确定碱基顺序。

特点

• 优点：准确性高，测序读长可达1000bp，结果直观可视，适合低通量样本研究。在检测800bp以内DNA序列上的碱基变异时，精度极高。

·  缺点：测序通量低，一次只能测一条序列，大量测序成本高。难以检出高GC和重复序列区域，也不能检出大片段缺失和拷贝数变异。

应用

• 科研领域：用于基因克隆、基因突变检测（SNP）、基因组组装完整性验证等。在人类基因组计划中，Sanger测序是主要技术手段。

·  临床医学：用于肿瘤突变基因检测、单基因遗传病检测、微生物鉴定、HLA分型等。此外，还用于验证二代测序结果。

一代测序技术因其高准确性和可靠性，至今仍被视为测序领域的“金标准”。

样本类型： 血液（全血）或者组织，细胞等。

样本抽提方式： 基因组抽提DNA；

流程： 抽提DNA; 设计PCR 引物；PCR 反应；测序；