产品参数
严格质控流程：
1．RNA抽提
采用miRNeasy Mini Kit (Qiagen, 217004)进行RNA纯化，确保提取的RNA片段长度大于18个核苷酸（nt），从而获得高质量的总RNA。该试剂盒专为高效提取RNA设计，能够有效去除杂质，保证RNA的完整性和纯度。
2．样本质检
所有样本均采用Agilent 4200 TapeStation系统进行全面质检，而非仅进行抽检。通过该系统，可以精确测量每个样本的RIN值（RNA完整性指数）、28S/18S rRNA比值、总RNA量值以及浓度值。此外，每个样本还会生成单独的电泳峰值图片，直观展示RNA的完整性。这种全面且细致的质检方式，符合发表在高水平学术杂志上对RNA样本检测的最高标准，确保实验数据的可靠性和重复性。
RNAseq-polyA 提取
- 原理：真核生物的大多数mRNA在3'端都有一个polyA尾，通过使用带有oligo(dT)的磁珠可以特异性地捕获这些polyA+的RNA分子。
· 目的：富集mRNA和其他polyA+的非编码RNA，同时去除大部分非polyA的RNA（如rRNA），从而提高测序效率。
建库
- 步骤：
- RNA片段化：将提取的RNA片段化，以便后续的cDNA合成。
· 3'端适配器连接：将3'端适配器连接到polyA+ RNA的3'端。
· 逆转录合成cDNA：使用逆转录酶将RNA转录为cDNA。
· PCR扩增：对cDNA进行PCR扩增，以获得足够的量用于测序。
· 特点：该过程需要精确控制反应条件，以确保高质量的文库构建。
测序（MGI 6G 华大平台）
- 平台介绍：MGI 6G是华大基因开发的测序平台，具有高通量、高准确性和低成本的特点。
· 测序原理：基于联合探针锚定聚合技术（cPAS）和DNA纳米球技术，能够快速准确地读取DNA序列。
· 优势：适用于大规模转录组测序项目，能够提供丰富的转录组信息。
标准分析
- 内容：
- 质量控制：对测序数据进行质量评估和过滤，去除低质量读段和接头序列。
· 比对分析：将高质量的测序读段比对到参考基因组上，确定转录本的位置。
· 定量分析：计算每个基因或转录本的表达量。
· 差异表达分析：比较不同样本之间的基因表达差异。
· polyA尾分析：研究polyA尾的长度分布和变化，这对于理解基因表达调控具有重要意义。
· 意义：通过标准分析，可以全面了解样本的转录组特征，为后续的生物学研究提供重要依据。
整个“RNAseq-polyA 提取+建库+测序 MGI 6G（华大平台）+标准分析”的流程，是研究转录组中polyA+ RNA分子的有效手段，广泛应用于基因表达调控、疾病机理研究等领域。
1. 样本类型可填：细胞、FFPE白片、新鲜冻存组织、全血、血浆、血清、cfDNA、DNA、RNA等；
2. 检测项目可填：全基因组测序、全外显子测序、转录组测序（Poly-A法）、转录组测序（Ribo-zero法）、小RNA测序等。
二．注意事项
1. 样本建议置于1.5mL离心管里；管壁或管盖标明样本名称，只能包含字母、数字和符号下划线“_”，确保样本管实际标记名称和《入库样本信息表》上信息完全一致。
2. 样本管建议用封口膜封好，螺旋口样本管确保拧紧，以免管盖弹开发生交错污染。样品包装请套上自封袋，且尽量将样品置于缓冲物如泡沫垫、棉花、冻存盒内，以免运输过程中损坏。
3. 新鲜组织、全血、血浆、细胞和RNA样本，推荐使用干冰运输；DNA样本推荐使用冰袋或干冰运输；FFPE样本常温运输即可。
样本处理与运输要求
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应用项目
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样本类型
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处理要求
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运输要求
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WGS/WES等DNA项目
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gDNA
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l DNA溶于TE buffer；
l 总量≥1 ug，浓度≥40 ng/uL
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R干冰
R冰袋
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外周血
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l 建议使用柠檬酸钠管或EDTA管，不建议肝素抗凝；
l 总量≥1 mL
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R干冰
R冰袋
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培养细胞
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l 细胞离心去除培养液，PBS洗两次，收集细胞沉淀，立即在液氮中急冻；
l 细胞数量≥2×106
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R干冰
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新鲜冻存组织
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l 活体取材后Nuclease-free水进行漂洗，并剔除结缔组织或毛发等非研究组织；样本在冰上分割成30-50 mg的小块后，分装在预冷的EP管中，立即在液氮中急冻；
l 样本量≥30 mg
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R干冰
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石蜡包埋组织
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l 切片为白片，不进行染色、高pH、重金属离子染色等处理；
l 切片5-10片；
l 切片厚度10 μm，面积100 mm2
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R冰袋
R常温
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RNAseq/小RNAseq等
RNA项目
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总RNA
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l 总RNA溶解于DEPC水或Nuclease-free水；
l 总量≥1 ug，浓度≥40 ng/uL
l OD260/280=1.8-2.1，完整性RINA≥6
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R干冰
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外周血
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l 首选方案：建议使用PAXgene管；
l 第二方案：建议使用柠檬酸钠管或EDTA管，不建议肝素抗凝；
l 总量≥2 mL
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R干冰
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血浆/血清
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l 总量≥1 mL
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R干冰
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培养细胞
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l 首选方案：细胞离心去除培养液，PBS洗两次，收集细胞沉淀，立即加入TRIzol溶液，并充分吹打混匀；
l 第二方案：细胞离心去除培养液，PBS洗两次，收集细胞沉淀，立即在液氮中急冻；
l 细胞数量≥2×106
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R干冰
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新鲜冻存组织
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l 首选方案：活体取材后Nuclease-free水进行漂洗，并剔除结缔组织或毛发等非研究组织；样本在冰上分割成30-50 mg的小块后，保存在RNAlater溶液中。
l 第二方案：活体取材后Nuclease-free水进行漂洗，并剔除结缔组织或毛发等非研究组织；样本在冰上分割成30-50 mg的小块后，分装在预冷的EP管中，液体急冻；
l 样本量≥30 mg
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R干冰
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石蜡包埋组织
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l 切片为白片，不进行染色、高pH、重金属离子染色等处理；
l 切片5-10片；
l 切片厚度10 μm，面积100 mm2
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R冰袋
R常温
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