BIOTNT 提供 Taqman 探针的设计和合成服务；

设计和合成费用分开计算。

不提供仅设计服务。

设计费用为一套引物+探针，设计费用为50元，合成费用为如下的情况：

 合成更多OD 请查询：PCR 引物探针合成/修饰和标记。

Taqman 探针设计原则：

总体原则：

* 先选择好探针，然后设计引物使其尽可能的靠近探针。

* 所选序列应该高度特异，尽量选择具有最小二级结构的扩增片段――这是因为二级结构会影响反应效率，而且还会阻碍酶的扩增。建议先进行二级结构检测，如果不能避免二级结构，那么就要相应提高退火温度。

*理想的最好能在100-150bp内，扩增片段越短，有效的扩增反应就越容易获得。较短的扩增片段也容易保证分析的一致性。

* 保持GC含量在20％和80％之间，GC富含区容易产生非特异反应，从而会导致扩增效率的降低，以及出现在荧光染料分析中非特异信号。

* 为了保证效率和重复性，应避免重复的核苷酸序列，尤其是G（不能有4个连续的G）

* 将引物和探针互相进行配对检测，以避免二聚体和发卡结构的形成。　

探针设计原则：

* 探针位置尽可能地靠近上游引物

* 探针长度应在15-30bp（最好是20-30bp)，以保证结合特异性

* 检测探针的DNA折叠和二级结构

* Tm值在65-70℃，通常比引物TM值高5-10℃（至少要5℃），GC含量在40%－70%

* 探针的5’端应避免使用G鸟嘌呤――因为5'G会有淬灭作用，而且即使是被切割下来还会存在淬灭作用。

* 整条探针中，碱基C的含量要明显高于G的含量――G含量高会降低反应效率，这时就应选择配对的另一条链作为探针。

* 为确保引物探针的特异性，最好将设计好的序列在blast中核实一次，如果发现有非特异性互补区，建议重新设计引物探针。　

引物设计原则：

* 序列选取应在基因的保守区段

* 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对，避免引物自身形成环状发卡结构；

* 典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了特异性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。

* Tm值在55－65℃（因为60℃核酸外切酶活性最高），GC含量在40%－60%；

* 引物之间的TM相差避免超过2℃；

* 引物的3’端避免使用碱基A，引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基；

* 引物末端（最后5个核苷酸）不能有超过2个的G和C。