MBP 4FF(6FF)琼脂糖树脂

MBP 4(6)Fast Flow, Agarose Resin

产品描述

MBP 4FF（6FF） Agarose Resin是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白 (MBP) 标签蛋白的亲和层析介质。MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过呈表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBP 4FF（6FF） Agarose Resin可以一步纯化MBP融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10 mM 麦芽糖进行温和洗脱，保护了标签蛋白的活性。如果要去除MBP融合部分可用位点特异性蛋白酶切除。

基础参数

产品信息

运输与保存方法

使用方法

1. 缓冲液的准备

1.1 所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22 µm 或 0.45 µm 滤膜过滤。平衡／洗杂液 20 mM Tris-HCI， 200 mM NaCl， 1 mM EDTA， pH7.4 洗脱液： 20 mM Tris-HCI， 1 mM EDTA， 10 mM 麦芽糖，pH 7.4

注意： 平衡液和洗脱液中可加入 1 mM DTT 或 10 mM β－巯基乙醇

2. 样品准备

样品在上样前建议离心或用0.22 µm 或 0.45 µm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3. 重力柱的装填（若直接购买重力柱产品则可略过此步骤）

3.1 取合适规格的重力层析柱，装入下垫片，加入适量纯水润洗柱管和垫片，关闭下出口。

3.2 将 MBP 4FF（6FF） Agarose Resin混合均匀，用枪头吸取适量浆液加入至重力柱中 （介质实际体积占悬液的一半）， 打开下出口流干保护液。

3.3 加入适益纯水冲洗介质， 待柱管中液体重力流干后， 关闭下出口。

3.4 装入润洗后的上垫片， 确保垫片与填料之前没有空隙， 且保持水平。

3.5 装填好的重力柱可以直接加入平衡液进行平衡， 暂不使用时则加入保护液， 2-8 ℃保存。

4. 样品纯化

4.1 孵育法纯化

1) 根据纯化的样品量，取适量 MBP 4FF（6FF） Agarose Resin 加入离心管中， 1000 rpm 离心 1 min, 吸弃上清； 也可加入重力柱中，流干保护液。

2) 向离心管中加入 5 倍介质体积的平衡液清洗介质， 1000 rpm 离心 1 min, 吸弃上清； 如使用重力柱，则直接在重力柱中清洗，直接重力流干平衡液；重复两次以上。

3) 加入样品，封闭离心管或重力柱管， 4 ℃ 振荡孵育 2-4 h 或者 37°C孵育30 min-2 h。

4) 孵育结束后， 1000 rpm 离心 1 min，吸弃上清，或过滤收集介质，上清保留作为流穿，用于电泳鉴定。

5) 用 5 倍介质体积的洗杂液清洗介质， 1000 rpm 离心 1 min 或重力柱管过滤， 去除上清（注意不要吸到介质）， 重复 3-5 次， 中间建议更换新离心管。

6) 加入 3-5 倍柱体积的洗脱液进行洗脱，室温孵育 5min, 1000 rpm 离心 1 min 或重力柱管收集洗脱液，可重复 2-3 次。

4.2 重力柱法纯化

1) 将装填好的 MBP 4FF（6FF） Agarose Resin 重力柱用 5 倍柱体积平衡液进行平衡，使 填料处于与目的蛋白相同的缓冲液体系下，重复 2-3 次。

2) 将样品加到平衡好的重力柱中，样品保留时间至少 2 min, 保证样品和介质充分接触， 收集流出液，可以反复上样增加结合效率。

3) 用 10-15 倍柱体积的洗杂液进行洗杂，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4) 使用 5-10 倍柱体积的洗脱液洗脱，分段收集，每一个柱体积收集一管，分别检测，既可以保证所有结合的目的蛋白被洗脱，又可以得到高纯度和高浓度的蛋白。

介质洗脱结束后，用 平衡液冲洗 5-10 柱体积，然后用纯水冲洗 5-10个柱体积，再用 20％乙醇冲洗2 个柱体积，置于 2-8 ℃保存。

5. SDS-PAGE 检测

将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。

6. 填料清洗

MBP 4FF（6FF）Agarose Resin 纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对填料进行清洗。

6.1 用3 倍柱体积的去离子水；

6.2 用3 倍柱体积的0.1% SDS 或 0.5 M NaOH 溶液；

6.3 用3 倍柱体积去离子水， 20％乙醇 2-8 ℃保存。

应用案例

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注意事项

（1）本产品仅限科学研究使用，不得用于临床诊断和治疗等领域。

（2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。