产品参数
Ni-NTA 4(6)FF 亲和琼脂糖树脂
Protein A, Agarose Resin
产品描述
Ni-NTA 4FF（6FF）Agarose Resin以交联琼脂糖微球为基质，通过活化偶联次氮基三乙酸（NTA），再螯合Ni2+所形成的稳定八面体结构。与亚氨基二乙酸（IDA）相比，具有更好的螯合剂、还原剂、碱性的耐受性，如样品中含有1-10 mM EDTA或1-10 mM β-巯基乙醇或5 mM DTT，可正常纯化；在螯合镍的情况下，也可以用0.1M NaOH清洗。
Ni-NTA琼脂糖凝胶FF主要用于纯化带组氨酸标签（His-Tag）的重组蛋白。纯化原理是利用重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可与过渡金属Ni2+形成稳定的配位键，因此能特异、牢固、可逆地吸附于固定这些金属离子的基质，结合了His-Tag重组蛋白的Ni-NTA琼脂糖凝胶FF一般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱。
基础参数
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基质
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4（6）%交联琼脂糖凝胶
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配基
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-N(CH2COOH)3
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填料粒径
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45-165 μm
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最大流速
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450 cm/h
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推荐流速
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50-300 cm/h
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pH稳定性
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pH 3-10工作，pH 2-12清洗
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耐反压
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0.3 MPa
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载量
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≥20 mg His-tag重组蛋白/ml
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产品信息
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产品名称
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货号
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规格
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Ni-NTA 4FF Agarose Resin
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P-1001-01
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10 mL
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P-1001-02
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50 mL
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P-1001-03
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100 mL
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P-1001-04
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500 mL
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Ni-NTA 6FF Agarose Resin
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P-1002-01
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10 mL
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P-1002-02
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50 mL
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P-1002-03
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100 mL
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P-1002-04
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500 mL
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运输与保存方法
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储存条件
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4-8 ℃、不可冻存
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运输条件
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冰袋运输
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使用方法
1. 色谱柱装填
（1）所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
（2）在柱子下端加入蒸馏水，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的蒸馏水。
（3）将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降。
（4）柱压不超过0.3 MPa，如果装柱系统中无法测柱压，则正常流速下填装。
（5）填装好的Ni-NTA琼脂糖凝胶FF柱用2-5个柱体积的初始缓冲溶液平衡，建议流速100 cm/h，平衡后的柱子可以用于His-Tag重组蛋白的上样和洗脱纯化。
2. 上样
（1）缓冲液选择：一般选用pH6-8的结合缓冲液，常用缓冲液有10-00 mM 磷酸钠缓冲液、20-200 mM Tris-HCl缓冲液等。在缓冲液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl，以消除离子交换作用。在初次使用Ni-NTA琼脂糖凝胶FF，推荐使用50 mM PBS（50 mM NaH2PO4，0.5M NaCl，NaOH调节pH 7.4）作为结合缓冲液。
（2）样品处理：样品的缓冲液应与所选结合缓冲液一致。为保证缓冲液一致，可以在结合缓冲液中破碎细菌、或调解pH与结合缓冲液一致、或交换至结合缓冲液（常用方法有透析、超滤、脱盐柱换液等）、或用结合缓冲液稀释2-10倍等。样品上柱前应0.45 μm过滤。
3. 洗脱
（1）Ni-NTA琼脂糖凝胶FF最常用的洗脱方法为增加咪唑浓度进行洗脱。
（2）咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用HCl进行调节pH。
（3）在初次使用Ni-NTA琼脂糖凝胶FF，不知道洗脱的咪唑浓度，建议在结合缓冲液中分别加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑，浓度从低到高，分别洗脱和收集，通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱组份。
（4）有条件的也可以进行线性咪唑梯度洗脱，确定较佳洗脱条件。
4. 在位清洗
在多次使用后需要在位清洗，常用方法为先5个柱体积蒸馏水清洗，再用1-3个柱体积50 mM NaOH清洗10-20 min，立即用5个柱体积结合缓冲液（50 mM PBS）清洗平衡。
应用案例
Ni-NTA 6FF Agarose Resin在His标签重组蛋白纯化中的应用
原核体系表达某His标签蛋白（分子量40kDa）
1: 破碎后上清
2: 破碎后沉淀
3: 流穿
4: 洗杂
5,6: 50 mM咪唑洗脱的第1管和第3管
7,8: 100 mM咪唑洗脱的第1管和第3管
（接上图）
表达蛋白：pET-28a-03519
1,2: 150 mM咪唑洗脱的第1管和第3管
3,4: 200 mM咪唑洗脱的第1管和第3管
5,6: 250 mM咪唑洗脱的第1管和第3管
7,8: 300 mM咪唑洗脱的第1管和第3管
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产品名称
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货号
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规格
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Ni-NTA 预装上机柱
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PK-1001-01
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1mL
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Ni-NTA 预装上机柱
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PK-1001-02
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5*1mL
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Ni-NTA 预装上机柱
|
PK-1001-03
|
5mL
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Ni-NTA 预装上机柱
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PK-1001-04
|
5*5mL
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Ni-NTA 预装重力柱
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PKG-1101-01
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1mL
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Ni-NTA 预装重力柱
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PKG-1101-02
|
5*1mL
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Ni-NTA 预装重力柱
|
PKG-1101-03
|
5mL
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Ni-NTA 预装重力柱
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PKG-1101-04
|
5*5mL
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注意事项
（1）本产品仅限科学研究使用，不得用于临床诊断和治疗等领域。
（2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。