产品参数
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产品编号
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产品名称
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产品包装
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产品价格
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A3010A0001
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小鼠端粒酶活性检测试剂盒(TERT mRNA染料法)
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50次
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488.00元
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A3010A0001M
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小鼠端粒酶活性检测试剂盒(TERT mRNA染料法)
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200次
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1588.00元
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BioTNT的小鼠端粒酶活性检测试剂盒(TERT mRNA染料法) (mouse Telomerase Activity Assay Kit by SYBR Green qPCR for TERT mRNA)，又称qPCR染料法小鼠端粒酶催化亚基mTERT检测试剂盒(mouse Telomerase Reverse Transcriptase Subunit Assay Kit by qPCR with SYBR Green)，或mTERT qPCR检测试剂盒(mTERT qPCR Assay Kit)，是一种基于端粒酶催化亚基TERT基因和内参基因GAPDH的特异性引物，快速、灵敏地检测小鼠细胞或组织内端粒酶催化亚基(mTERT)表达量从而间接衡量端粒酶活性的试剂盒。
端粒酶(Telomerase)是一种由蛋白质和RNA组成的特殊逆转录酶，与真核细胞染色体末端端粒的合成直接相关。正常体细胞端粒的长度随着细胞的分裂逐渐缩短，而端粒酶活性增强则可以有效维持端粒的长度。异常的端粒酶活性升高会导致细胞异常增殖而发生癌变。除了正常的小鼠类白细胞(如活化的B淋巴细胞和T淋巴细胞)、小鼠类生殖系组织(成年睾丸和卵巢，但不包括成熟精子和卵母细胞)和增殖干细胞外，通常在正常体细胞中检测不到端粒酶活性，但是多数小鼠类癌症以及一些癌前病变和良性肿瘤中可以检测到端粒酶活性异常增高，因此高灵敏快速检测端粒酶活性在癌症的早期诊断中具有重要意义[1]。小鼠端粒酶主要由三部分组成，包括端粒酶逆转录酶(mouse telomerase reverse transcriptase, mTERT)、小鼠端粒酶RNA (mouse telomerase RNA, hTER or hTR)以及端粒酶相关蛋白(mouse telomerase associated proteins)。其中mTERT被认为是端粒酶活性的关键组分，编码mTERT的mRNA水平与端粒酶整体活性基本一致，因此可以用mTERT的mRNA水平来衡量端粒酶活性。
目前，检测端粒酶活性最常用的方法分为直接检测法和间接检测法。直接检测法主要检测端粒酶是否可以延伸DNA模板，通过核酸电泳或者探针杂交检测DNA延伸的长度，以此判断端粒酶的活性高低，如端粒重复序列扩增法(Telomerase repeat amplification protocol, TRAP)、端粒重复序列延伸法、比色法、荧光法、表面增强拉曼光谱法等，这些方法需要提取蛋白，操作较复杂，灵敏度不高；或需要放射性同位素标记，对于操作环境要求高，不安全；或重复性差、周期长。
而间接检测法主要检测端粒酶催化亚基mTERT的mRNA水平来间接反映端粒酶的活性。该方法操作相对简便，只需抽提mRNA、反转录成cDNA、荧光定量PCR这三个步骤即可完成，具有较高的灵敏度和准确性。本试剂盒采用的是间接检测法。
本试剂盒以端粒酶的TERT基因和内参GAPDH基因的mRNA作为检测靶点，提供了优化的反转录引物(Specific RT Primers (10X)、TERT Primer Mix (10X)和GAPDH Primer Mix (10X)，同时提供了qPCR实验所需的预混液SYBR Green qPCR Mix (2X)。
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产品编号
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产品名称
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产品包装
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产品价格
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A3010A0001
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小鼠端粒酶活性检测试剂盒(TERT mRNA染料法)
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50次
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488.00元
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A3010A0001M
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小鼠端粒酶活性检测试剂盒(TERT mRNA染料法)
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200次
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1588.00元
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本试剂盒提供了Low ROX，广泛兼容于无需ROX和需要Low ROX或High ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。ROX的作用是用于校正与PCR无关的荧光波动，从而最大限度减少孔间差异。这种差异可能由多种因素引起，如移液误差及样品蒸发等。不同的荧光定量PCR仪对ROX的要求不同，请根据实际所用仪器在配制反应体系时选择高浓度ROX (High ROX)、低浓度ROX (Low ROX)或不加ROX。常用仪器所需ROX类型请参考如下表格。
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添加ROX类型
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适用PCR仪
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不需添加
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Bio-Rad: CFX384, CFX96, MiniOpticon, iCycler IQ, MyiQ and iQ5;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex and realplex2 s;
Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 6000;
Roche LightCycler 480; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR
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Low ROX
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ABI: 7500(Fast), ViiA 7, QuantStudio 6 and 7 Flex Systems;
Stratagene: Mx3000P, Mx3005P and Mx4000;
Qiagen/Corbett Rotor-Gene: 3000;
Bio-Rad/MJ: Chromo4, Opticon 2 and Opticon
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High ROX
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ABI GeneAmp 5700; ABI PRISM 7000, 7700; ABI 7300, 7900HT(Fast); ABI StepOne (Plus)
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本试剂盒如果用于常规的96孔板qPCR检测(建议反应体系为20µl)或384孔板qPCR检测(建议反应体系为10µl)，本产品小包装分别可以进行50次和100次检测，中包装分别可进行200次和400次检测。检测次数为总次数，包括使用端粒引物和内参引物体系及样品和阴性对照的测试。
包装清单：
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产品名称
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50T包装
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200T包装
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SYBR Green qPCR Mix (2X)
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1ml
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4ml
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Specific RT Primers (10X)
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100μl
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100μl
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mTERT Primer 上游引物(50X)
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100μl
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100μl
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mTERT Primer 下游引物(50X)
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100μl
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100μl
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mGAPDH Primer 上游引物(50X)
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100μl
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100μl
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mGAPDH Primer 下游引物(50X)
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100μl
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100μl
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ddH2O
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1ml
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2ml
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说明书
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1份
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1份
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保存条件：
-20ºC保存，一年有效。其中SYBR Green qPCR Mix (2X)须避光保存，并尽量避免反复冻融。
注意事项：
使用前需确保试剂完全融化，上下颠倒轻轻混匀后使用。混匀过程中尽量避免产生气泡。
SYBR Green qPCR Mix (2X)中含有荧光染料，保存本产品或设置PCR反应时应避免强光照射，以尽量避免荧光淬灭问题。
qPCR检测是超高灵敏度的检测，请尽量在标准的PCR实验室中进行检测。PCR反应设置区域须尽量避免各种可能的扩增产物的污染。建议勿在PCR反应设置区域撕开PCR封板膜或打开PCR管盖，PCR产物宜密封后按扩增后产物要求处理，以避免超高浓度的PCR产物污染实验环境。
建议使用带滤芯的吸头配制PCR体系，这样可以最大限度的避免污染导致的假阳性。
本产品仅限于专业小鼠的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。