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BioTNT TRIZol® RNA提取试剂盒(组织、细胞)
    产品中心    >>  试剂    >>  分子生物学试剂    >>  qPCR kits & 核酸抽提 关   闭
TRIZol® RNA提取试剂盒(组织、细胞)
分类:qPCR kits & 核酸抽提
品牌:BioTNT
货号:A2010A0403
原价:3740
现价:¥2880.00    节省:¥860
规格:200T
产地:BioTNT
产品参数

--------------------------------------点击查看《产品说明书》--------------------------------------



 TRIzol® RNA提取试剂盒

 

试剂组成

 

A2010A0403

200T

Storage

TRIzol Reagent

50 mL/vial  4 Vial

4

1--3氯丙烷

40mL/vial  1 Vial

4

75% DEPC水乙醇

50 mL/vial  2 Vial

4

异丙醇

50 mL/vial  2 Vial

4

RNase-free ddH2O

1.5 mL/vial  4 Vial

4

说明书

1

 

 

产品介绍

TRIzol®是一种快捷方便的总RNA提取试剂,可以从动物组织、各种微生物及细胞等样本中提取总RNA。在样品处理过程中,TRIzol可完全充分裂解样品,同时保持RNA的完整性。加入1--3氯丙烷离心后,溶液形成上清层(水相)、中间层和有机相(下层)。取出上清层,可用异丙醇沉淀回收RNA;中间层用乙醇沉淀回收DNA;有机相可用异丙醇沉淀回收蛋白。

本试剂盒提取RNA方便快速,整个操作过程可在二个小时内完成,提取的RNA无蛋白和DNA的污染,纯度髙,可直接用于Northern Blotting、斑点杂交、polyA筛选、mRNA纯化、体外翻译、RNase保护分析、RT-PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。

 

产品使用限制

1.      本产品只用于分子生物学研究。其不应用于诊断、预防和治疗疾病。在使用本产品时应遵从相应的注意事项;

2.      本产品中部分试剂有腐蚀性或毒性,勿直接接触皮肤或吞咽;

3.      操作时请穿戴实验服和手套,如接触皮肤,应立即用大量清水冲洗;

4.      误食或其他危急情况,请及时到医院就治;

5.      部分试剂易燃,请注意消防安全。

 

客户自备设备和试剂

1.      1.5mL Eppendorf管(无菌、无酶、RNase-free;货号A2010B0X04);

2.      RNase-free Tips1000μL200μL的枪头;货号A2010B0X09);

3.      移液器(200μL1000μL);

4.      电动匀浆器,组织破碎器或者超声破碎仪;

5.      12000g冷冻离心机;

 

操作说明

1.      称取100mg湿重组织,加入1000μLTRIzol,用眼科剪剪碎并用电动匀浆器或者手动匀浆器匀浆,室温(20-25℃)放置5mins,使其充分裂解。

2.      培养细胞至1.5×106以上,加入1000μLTrizol,用1mL的移液枪来回充分吹打200下左右,或用超声破碎仪破碎细胞。室温(20-25℃)放置5mins,使其充分裂解。

3.      4 12000rpm离心5mins,将上清转移至干净的离心管。

4.      加入200μL1--3氯丙烷,上下颠倒混匀,室温放置15mins。注:禁用漩涡振荡器,以免基因组DNA断裂污染。

5.      4 12000rpm离心15mins

6.      吸取上层水相,至干净的离心管中。

注:千万不要吸取中间界面。若同时提取DNA和蛋白质,则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提RNA,则弃下层酚相。

7.      加入500μL异丙醇,上下颠倒混匀,室温放置10mins

8.      4 12000rpm离心10mins,弃上清,RNA沉于管底。

9.      加入500μL 75% DEPC水乙醇,温和振荡离心管,悬浮沉淀。

10.   4 8000rpm离心5mins,弃上清。

11.   室温干燥5mins

12.   加入RNase-free ddH2O溶解RNA样品,57℃金属浴温育5mins

13.   所得RNA样本 -80℃储存备用。

 

注意事项

1.      基因组DNA含量较高的样本(如上皮组织),RNA样本很容易残留基因组DNA污染,强烈建议用DNase对基因组DNA进行消化处理。

2.      组织和细胞裂解后,加1--3氯丙烷前,样品可在-80℃放置一个月以上;

3.      RNA沉淀可以保存在75% DEPC水乙醇中,-20℃可保存一年以上。

4.      1mL TRIzol可以提取50-100mg组织,组织或细胞用量过多会导致多余组织无法完全裂解释放RNA形成杂质,增加了RNA纯化的难度以及基因组DNA污染的风险。

5.      DEPC是可挥发的剧毒物,使用时需在通风厨中操作,高温可水解成乙醇和二氧化碳。

6.      经常更换新手套,以防止RNase污染;

7.      使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染;

8.      RNATRIzol试剂中时短时间内不会被RNase降解,但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料或玻璃器皿(玻璃器皿可在150烧烤4小时,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟,然后用DEPC水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase);

 

RNA质量控制

1.      O.D值定量RNA浓度,测定RNA产物溶液在A260A280O.D.值,A260/A280值在1.6-2.0之间说明RNA提取结果良好。(<1.6时表明有蛋白质或酚污染,>2.0时表明可能有基因组DNA、异硫氰酸(TRIzol)残存)

2.      逆转录cDNA,将所有样本做一次内参PCR以及基因组内含子内参PCR预实验,判断RNA的量以及基因组DNA污染情况。

 

 

参考得率

小鼠肝脏组织:( μg RNA/mg组织) 3.0-5.5 μg

小鼠肾脏组织:( μg RNA/mg组织) 1.5-3.0 μg

小鼠脾脏组织:( μg RNA/mg组织) 1.5-3.5 μg

小鼠心脏组织:( μg RNA/mg组织) 0.4-1.0 μg

小鼠肺组织:( μg RNA/mg组织) 0.6-1.2 μg

小鼠脑组织:( μg RNA/mg组织) 0.4-0.8 μg

293T细胞:( μg RNA/106细胞) 8-10 μg

Hela细胞:( μg RNA/106细胞) 20 μg

 

问题指南

问题

原因

解决方案

RNA得率

裂解不完全

将第12步的沉淀按步骤再处理一遍。

减少初始样本量。

眼科剪处理组织样本时需剪碎一点,使样本与TRIzol充分接触。

样本质量差

RNA的得率和质量对样本的新鲜度有较高要求,请使用新鲜样本,或在-80℃中冻存不超过半年的样本。

RNA复溶操作不正确

使用无RNA酶的灭菌DEPC ddH2O TE缓冲液复溶,复溶体积不能加太多,人为降低了RNA浓度。

RNA降解

RNA样本中含有RNase

RNA样本按上述步骤再处理一遍。

样本取材到裂解过程污染

组织离体或细胞离开培养基后需立即加入TRIzol,保持TRIzol浸没状态,尽早进行RNA提取操作

逆转录效率低

RNA样本中残留乙醇

重复步骤9-13,过程中注重RNA干燥

RNA样本中残留盐离子

重复步骤9-13

A260/A280不在1.7-2.0之间

蛋白质或酚污染

重复步骤4-13,再用有机相纯化一遍

异硫氰酸(TRIzol)残留

重复步骤4-13,再用有机相纯化一遍

 

 

技术支持

BioTNT为其所提供的技术支持质量和效率而自豪。我们的技术支持部门在样品及检测领域及对BioTNT产品具有丰富的实践经验和充足的理论知识。如果您PCR或其它产品有问题或遇到困难,请联系我们,无需迟疑。

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