产品参数
cDNA第一链合成RNA逆转录试剂盒说明书
货号：A2010A0604(10ul*40T)， A2010A0601(10ul*100T), A2010A0603(10ul*400T)；
试剂组成（请将试剂盒储存于-20度）
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A2010A0604
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(10ul*40T)
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5×Reaction Buffer（含Mg2+）
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120 μL/vial 1 Vial
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M-MLV 酶（200 Units/μL）
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20 μL/vial 1 Vial
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Recom. Rnasin（40 Units/μL）
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10 μL/vial 1 Vial
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通用引物oligo（dT）（100 μM）
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25 μL/vial 1 Vial
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随机引物GPR-6（100 μM）
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50 μL/vial 1 Vial
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10mM dNTP mix
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30 μL/vial 1 Vial
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RNase-free ddH2O
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1.5 mL/vial 1 Vial
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说明书
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1份
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A2010A0601
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(10ul*100T)
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5×Reaction Buffer（含Mg2+）
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300 μL/vial 1 Vial
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M-MLV 酶（200 Units/μL）
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50 μL/vial 1 Vial
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Recom. Rnasin（40 Units/μL）
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25 μL/vial 1 Vial
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通用引物oligo（dT）（100 μM）
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60 μL/vial 1 Vial
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随机引物GPR-6（100 μM）
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120 μL/vial 1 Vial
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10mM dNTP mix
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70 μL/vial 1 Vial
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RNase-free ddH2O
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1.5 mL/vial 1 Vial
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说明书
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1份
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A2010A0603
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10ul*400T
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5×Reaction Buffer（含Mg2+）
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1.5 mL/vial 1 Vial
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M-MLV 酶（200 Units/μL）
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200 μL/vial 1 Vial
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Recom. Rnasin（40 Units/μL）
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100 μL/vial 1 Vial
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通用引物oligo（dT）（100 μM）
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240 μL/vial 1 Vial
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随机引物GPR-6（100 μM）
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480 μL/vial 1 Vial
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10mM dNTP mix
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280 μL/vial 1 Vial
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RNase-free ddH2O
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1.5 mL/vial 4 Vial
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说明书
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1份
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产品介绍
cDNA 第一链合成试剂盒包括了一种全新高效逆转录酶、反应缓冲液及该实验中必需的反应组分。使用该试剂盒能够以总RNA 或mRNA 为模板高效逆转录成互补的cDNA 第一链，进而开展后继的相关实验。
试剂盒可逆转录0.1至10 μg 的总RNA每20 μL逆转录体系，我们推荐1-2 μg的总RNA每20 μL逆转录体系；
合成的cDNA模板用于定量PCR，cDNA模板可在-20℃条件下保存一年。
产品使用限制
1. 本产品只用于分子生物学研究。其不应用于诊断、预防和治疗疾病。在使用本产品时应遵从相应的注意事项；
2. 本产品中部分试剂有腐蚀性或毒性，勿直接接触皮肤或吞咽；
3. 操作时请穿戴实验服和手套，如接触皮肤，应立即用大量清水冲洗；
4. 误食或其他危急情况，请及时到医院就治；
5. 部分试剂易燃，请注意消防安全。
客户自备设备和试剂
1. 已制备的总RNA样本；
2. 0.6mL及1.5mL Eppendorf管（无菌、无酶、RNase-free；货号A2010B0X04）；
3. RNase-free Tips（1000μL、200μL的枪头；货号A2010B0X09）；
4. 移液器（200μL，1000μL）；
5. 恒温水浴锅或金属浴，冰浴盒；
6. 12000g冷冻离心机；
操作说明
1. 提前将试剂盒中试剂及总RNA样本放置冰浴，温度平衡至冰点；
2. 震荡混匀所有试剂及总RNA样本并瞬时离心；
3. 在每个0.6 mL Rnase-free Eppendorf管中加入1-2 μg的总RNA样本；
4. 每管加入0.8 μl OligoDT以及1.6 μL随机引物GPR-6，补充适量的DEPC水至总体积达10 μL；（如所有样本RNA量相近，无需通过体积调整RNA量均一，这步也可计算配制总管预混后分装）
5. 震荡混匀后瞬时离心；
6. 恒温金属浴70℃温育5 mins，冰浴备用；
7. 按下表配置RT反应液，震荡混匀；
下表为1份样本的量，如需要逆转录n份的RNA，请配置n+1份进行分装：
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反应液组分
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20-μL体系
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终浓度
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5×Reaction Buffer
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4.0 μL
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1×
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10mM dNTPmix
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1.0 μL
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0.5 mM
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Recombinant Rnasin（40 Units/μL）
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0.3 μL
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0.6 Units/μL
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M-MLV酶（200 Units/μL）
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0.8 μL
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8 Units/μL
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RNase-free ddH2O
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3.9 μL
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——
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共计
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10 μL
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8. 在冰浴后的每个离心管中加入RT反应液10 μL，此时离心管内总体积为20 μL：
9. 震荡混匀后瞬时离心；
10. 恒温金属浴中42℃反应60 mins；
11. cDNA产物应置于-20℃保存。
注意事项
1. 本试剂盒可逆转录合成体系为20 μL的cDNA样本，如需要加大体系，可等比增加加入试剂量；（例：合成100 μL的cDNA，所有试剂加入量乘以5倍）
2. 本试剂盒试剂额外损耗相对较大，建议客户根据自身样本数量订购相应规格的试剂盒，以免出现试剂浪费或不足现象；
3. 总RNA量建议大于100 ng，以保证cDNA得率；
4. 样本中建议避免有机物或酚污染，以保证逆转录效率；
5. M-MLV和Recombinant Rnasin含有甘油，在-20℃条件下是液体，保存时间为1年，避免保存在-80℃导致反复冻融，避免在常温下保存的时间过久影响效价；
6. 得到的cDNA产物建议直接用PCR 或者Real Time PCR进行内参验证。
技术支持
BioTNT为其所提供的技术支持质量和效率而自豪。我们的技术支持部门在样品及检测领域及对BioTNT产品具有丰富的实践经验和充足的理论知识。如果您PCR或其它产品有问题或遇到困难，请联系我们，无需迟疑。
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