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mRNA 低丰度分子实验体系：一步法逆转录与 qPCR 检测方案
在现代分子生物学研究中，对于低丰度 mRNA 的精准检测是探索基因表达调控机制、疾病诊断及治疗靶点研究等领域的关键环节。本方案聚焦于一步法逆转录和 qPCR 检测技术，为您呈现高效、灵敏的低丰度 mRNA 检测解决方案。
技术原理与应用优势
从组织、细胞或全血中抽提的总 RNA，富含 mRNA、lncRNA 以及 microRNA，因此可用于这三类核酸分子的检测。对于低丰度基因的 mRNA 检测，我们推荐采用一步法逆转录 mRNA 结合 qPCR 实验。
该一步法采用独特的单链特异性逆转录方式，区别于传统的 oligo dt 和随机引物逆转录方法，从而具备更高的灵敏度和特异性。其显著优势体现在：
l 操作简便：无需单独进行逆转录步骤，极大简化了实验流程。从完成 RNA 抽提开始，总时长可缩短至 1.5 小时即可出结果。
l 灵敏度高：特别适用于低丰度基因的检测，能够精准捕捉微量表达的 mRNA 信号。
实验操作流程
反应体系构建：
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组份名称（目的孔）
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组份名称（内参孔）
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加量(μl)
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反应终浓度
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备注
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Master PCR Mix
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Master PCR Mix
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2.5
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1 x
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Enzyme PCR Mix
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Enzyme PCR Mix
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2.5
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1 x
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正向引物
（10μM)
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内参正向引物
（10μM)
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0.2
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0.2 μM
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用户自备
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反向引物
（10μM)
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内参反向引物
（10μM)
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0.2
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0.2 μM
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待检样本
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待检样本
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0.5-2
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≤200ng
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补加DEPC 水至总体积
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补加DEPC 水至总体积
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10
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/
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仪器设置：
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步骤
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温度
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时间
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循环次数
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反转录
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50℃
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10-15分钟
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1
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解链及反转录酶灭活
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95℃
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5分钟
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1
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扩增
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95℃
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5-10 秒
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40-45
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?60℃
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15-30 秒
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熔解曲线分析
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使用仪器配套软件进行
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产品信息：
通过本 mRNA 低丰度分子实验体系，您能够高效、准确地检测低丰度 mRNA，为您的科研工作提供有力支持。